Preservação e fertilidade de espermatozóides ovinos recuperados de epidídimos mantidos à temperatura ambiente (18 a 25 c) até 48 horas post mortem

Abstract

Resumo; Os objetivos deste trabalho foram avaliar o período máximo para recuperação e preservação (refrigeração à 5°C e criopreservação) e o efeito da adição de 20% de plasma seminal aos diluidores para refrigeração e criopreservação dos espermatozoides ovinos coletados de epidídimos mantidos à temperatura ambiente (18-25°C) até 48 horas após a morte, além de identificar suas subpopulações espermáticas. Dez carneiros foram utilizados para coleta de sêmen em vagina artificial (AV) e posteriormente foram sacrificados para recuperação de espermatozoides da cauda do epidídimo 0 (G0), 6(G6), 12(G12), 24(G24) e 48 (G48) horas após a morte. Foram feitas análise de motilidade total (TM), motilidade progressiva (PM), morfologia e resistência ao teste hiposmótico (HOST) nas amostras a fresco. Foram realizadas análises de cinética espermática em sistema automatizado (Computer Assisted Sperm Analysis - CASA), reação acrossomal, integridade e estabilidade de membrana plasmática em citometria de fluxo nas amostras criopreservadas. Foi realizada a inseminação artificial (AI) laparoscópica em cem ovelhas com amostras descongeladas e exame ultrassonográfico para diagnóstico de gestação 60 dias após a AI. A análise estatística foi realizada com as médias dos parâmetros avaliados, e a análise multivariada da cinética espermática foi utilizada para identificar subpopulações espermáticas. Não foram encontradas diferenças significativas nas médias dos parâmetros avaliados a fresco ou após criopreservação entre o sêmen coletado em AV ou espermatozoides epididimários. Concluímos que é possível recuperar espermatozoides da cauda de epidídimos expostos à temperatura ambiente até 48 horas após a morte, contudo a motilidade total decresce (P<0,05) a partir de 24 horas pós-morte. A preservação espermática (refrigeração e criopreservação) foi viável quando os espermatozoides foram recuperados até 24 horas após a morte. A adição de 20% de plasma seminal aos diluidores não apresentou efeito positivo sobre os espermatozoides após refrigeração ou criopreservação. A taxa de gestação após AI não diferiu (P>0,05) entre os grupos estudados. Foi possível identificar três subpopulações espermáticas com base na cinética das amostras avaliadas. O período post mortem e a adição de 20% de plasma seminal influenciaram de forma negativa a porcentagem das subpopulações espermáticas. Não foi encontrada correlação significativa (P>0,05) entre as subpopulações espermáticas e a fertilidade após AI nas condições deste estudo.

Abstract: The objectives of this work were to evaluate the maximum period for recovery and preservation (refrigeration at 5 ° C and cryopreservation) and the effect of the addition of 20% of seminal plasma to the diluents for refrigeration and cryopreservation of ovine spermatozoa collected from epididymites kept at room temperature (18-25°C) up to 48 hours after death, and to identifying their spermatic subpopulations. Ten rams were used for collection of semen in an artificial vagina (AV) and were slaughtered for the recovery of spermatozoa from the epididymis cauda 0 (G0), 6 (G6), 12 (G12), 24 (G24) and 48 (G48) hours after death. Total motility (TM), progressive motility (PM), morphology and resistance to hyposmotic swelling test (HOST) were analyzed in fresh samples. Sperm kinetics in automated system (Computer Assisted Sperm Analysis - CASA), acrosomal reaction, plasma membrane integrity and stability were performed in flow cytometry in cryopreserved samples. Laparoscopic artificial insemination (AI) was performed on 100 sheep with thawed samples and ultrasonographic examination for diagnosis of pregnancy were performed 60 days after AI. Statistical analysis were performed using the means of the parameters evaluated, and the multivariate analysis of sperm kinetics were used to identify sperm subpopulations. No significant differences were found in parameters means of fresh samples or after cryopreservation between the semen collected in AV or epididymal spermatozoa. We conclude that it is possible to recover spermatozoa from the tail of epididyms exposed to room temperature up to 48 hours after death, but total motility decreases (P <0.05) after 24 hours postmortem. Sperm preservation (refrigeration and cryopreservation) was justified when spermatozoa were recovered up to 24 hours after death. The addition of 20% of seminal plasma to the diluents had no positive effect on the spermatozoa after refrigeration or cryopreservation. The gestation rate after AI did not differ (P> 0.05) between the groups. It was possible to identify three sperm subpopulations in the samples evaluated. The postmortem time and the addition of 20% of seminal plasma influenced negatively the percentage of sperm subpopulations. No significant correlation (P> 0.05) was found between spermatic subpopulations and fertility after AI.