Atividade biológica de fosfolipases-D do veneno de aranha do gênero loxosceles sobre queratinócitos em cultura

Abstract

Resumo : O loxoscelismo é o quadro clínico causado pela picada da aranha do gênero Loxosceles, conhecida popularmente como aranha-marrom. A picada pode desencadear sintomas graves, cutâneos e sistêmicos, tornando um problema de saúde pública no Brasil. Três principais espécies dessa aranha se destacam por serem as mais envolvidas com os acidentes no país, são elas: L. intermedia, L. gaucho e L. laeta. Presente no veneno da aranha-marrom, a toxina fosfolipase-D (FLD) é responsável por quase todos os sintomas clínicos do loxoscelismo, como edema e dermonecrose. Portanto, o objetivo deste trabalho é analisar e comparar a ação das FLDs do veneno das três principais espécies de aranha Loxosceles (LiRecDT1, LgRecDT1 e LlRecDT1), a partir de estudos in vitro na linhagem de queratinócitos (HaCat). Essa linhagem celular foi escolhida pois encontra-se na epiderme, que faz parte da pele, tecido no qual ocorre a picada e o veneno é inoculado. Primeiramente, as três FLDs foram expressas e purificadas e a eficácia desse procedimento foi comprovada por meio de um SDS-PAGE. Já para analisar se as toxinas expressas possuíam atividades enzimáticas, foi realizado um ensaio de atividade catalítica com o substrato esfingomielina. Em cultura, foram realizados ensaios de viabilidade e de proliferação. Para analisar a morfologia dos queratinócitos após a incubação com FLD de L. intermedia, foram observadas as morfologias das células ao longo de um período de tempo com auxílio de microscópio de luz invertida. Por fim, para analisar a interação das FLDs na superfície das células foi feito um ensaio de imunofluorescência com diferentes tempos de incubação das FLDs. Os resultados demonstraram que as três FLDs interagem com a membrana dessas células, mas só a de L. intermedia e a de L. laeta desencadeiam alterações nos queratinócitos, sendo a primeira capaz de diminuir a viabilidade celular e a segunda de desencadear proliferação. Logo, há a necessidade da realização de mais estudos para elucidar as diferenças nas atividades de cada uma das FLDs nessa linhagem celular