Análise de promotores candidatos à regulação pela proteína NtrC de Sinorhizobium fredii NGR234

Abstract

Resumo : Sinorhizobium fredii NGR234 é uma bactéria fixadora de nitrogênio que estabelece uma relação de simbiose com 112 gêneros de leguminosas e uma planta não-leguminosa. Contém muitos genes relacionados a fixação biológica de nitrogênio e a nodulação. Entre esses genes, muitos provavelmente são regulados pela proteína NtrC. Esta proteína é um ativador transcricional de genes envolvidos no metabolismo do nitrogênio. O software NtrC Finder prevê os sítios de ligação para esta proteína no genoma de bactérias, incluindo o genoma de Sinorhizobium fredii NGR234. Para esta bactéria, 177 genes foram apontados como regulados pela proteína NtrC e, entre eles, estão os genes ngr_b17280, nrtA, rhcC2 e tolC. O software define os candidatos através da sequência consenso do sítio de ligação à proteína NtrC. Este sítio está localizado próximo à região de ligação da RNA polimerase - s54. Este trabalho teve como objetivo avaliar in vitro as regiões promotoras dos genes ngr_b17280, nrtA, rhcC2 e tolC quanto à regulação pela proteína NtrC. As regiões promotoras foram amplificadas a partir do DNA genômico de S. fredii NGR234 e clonadas no vetor pTZ57. As quatro regiões clonadas foram sequenciadas e comparadas com o genoma de S. fredii NGR234 para confirmar a integridade das sequências. As regiões serão clonadas no vetor pPROBE-GT’ para serem fusionadas ao gene que codifica para a Proteína Verde Fluorescente – GFP. Estas construções serão transferidas para células da estirpe selvagem e de uma estirpe mutante ntrC- de S. fredii NGR234. A atividade das regiões promotoras será avaliada pela expressão de GFP nestas estirpes