Avaliação da antigenicidade de mimotopos de Leishmania amazonensis no diagnóstico de leishmanioses

Abstract

Resumo: Leishmania Ross, 1903 é um protozoário que causa infecção parasitária denominada leishmaniose. Apresentam-se em duas formas clínicas principais, a Leishmaniose Cutânea (LC) e Leishmaniose Visceral (LV). Mais de um milhão de novos casos ocorrem anualmente em todo o mundo, acometendo pessoas de todas as faixas etárias de ambos os sexos. Uma das dificuldades encontradas para o controle dessa doença é a falta de diagnóstico específico, pois não há um que seja considerado padrão ouro. O objetivo deste trabalho foi avaliar doze peptídeos sintéticos, mimotopos de L. amazonensis, quanto ao potencial antigênico para fins imunodiagnósticos. Uma infecção experimental de Balb C com L. amazonensis foi realizada, seguida da purificação das IgGs dos soros por precipitação, cromatografia e western blotting. Após, foi feita a técnica phage display e teste Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay (ELISA) para seleção dos fagos reagentes. Esses fagos foram amplificados e, os peptídeos pertencentes a esses fagos, sequenciados e analisados in silico. Doze peptídeos foram selecionados, sintetizados quimicamente por Fmoc e usados na substituição aos antígenos totais de L. braziliensis e L. infantum. Os peptídeos foram testados frente aos pools de soros humano positivo e negativo para LC e frente aos pools de soros canino positivo e negativo para LV pelo teste ELISA. Diferentes concentrações dos peptídeos e diluições dos soros foram testadas e são discutidas no presente trabalho. Com base na análise feita por meio das absorbâncias, de doze peptídeos, dois apresentaram significativa diferenciação na reatividade entre pool positivo (soros de humanos com LC) e negativo (soros de humanos). Esses doze peptídeos foram testados também frente aos soros de cães com LV e, dois apresentaram significativa diferenciação na reatividade entre pool positivo e pool negativo. Esse estudo indicou que, os peptídeos poderiam representar vantagens por serem antígenos sintéticos com reprodutibilidade na sua produção, podendo ser usados para imunodiagnóstico de LC ou LV. Palavras-chave: Phage Display. ELISA. Peptídeo sintético. Imunodiagnóstico.

Abstract: Leishmania Ross, 1903 is a protozoa that causes parasitic infection called leishmaniasis. They present themselves in two main clinical forms, Cutaneous Leishmaniasis (CL) and Visceral Leishmaniasis (VL). More than one million new cases occur annually worldwide, affecting people of all the age bands of both sexes. One of the difficulties encountered for controlling this disease is the lack of specific diagnosis, because there is no one that is regarded as gold standard. The objective of this work was to evaluate twelve synthetic peptides, mimotopos of L. amazonensis, for the antigenic potential for purposes immunodiagnostic tests. An experimental infection of Balb C with L. amazonensis was performed, followed by the purification of the IgGs of sera by precipitation, chromatography and western blotting. After, it was made the technique phage display and test Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay (ELISA) for selecting the phage reagents. These phage they were amplified and, the peptides belonging to these phage, sequenced and analyzed in silico. Twelve peptides were selected, chemically synthesized by Fmoc and used in substitution to the total antigens of L. braziliensis and L. infantum. The peptides have been tested against the pools of positive human serum and negative for CL and front of the positive and negative canine serum pools for VL by ELISA test. Different concentrations of serum peptides and dilutions have been tested and are discussed ain this work. Based on the analysis made through the absorbances, of twelve peptides, two presented significant differentiation in the reactivity between positive pool (serum of humans with CL) and negative (sera of humans). These twelve peptides were also tested against the sera of dogs with VL and, two presented significant differentiation in the reactivity between positive pool and negative pool. This study indicated that peptides could represent advantages for being synthetic antigens with reproducibility in their production, and can be used for immunodiagnostic of CL or VL. Keywords: Phage Display. ELISA. Synthetic Peptide. Immunodiagnostic.