Construção de bibliotecas genômicas enriquecidas em marcadores microssatélites para Cordia trichotoma (Vellozo) Arrabida ex Steudel (Louro Pardo)

Abstract

Resumo : Microssatélites são marcadores moleculares que representam uma poderosa ferramenta usada em estudos de variabilidade genética. Por serem altamente polimórficos é possível extrair um grande número de informações que permite conhecer a distribuição da variabilidade genética entre e dentro de populações naturais, importante para adotar estratégias eficazes para a conservação. Louro-pardo (Cordia trichotoma (Vellozo) Arrabida ex Steud) é uma planta nativa do Brasil que pertence ao gênero Cordia e possui várias características que a torna uma espécie atraente para diversos estudos. Assim como outras espécies existentes na Mata Atlântica, o louro-pardo encontra-se vulnerável à perda da variabilidade genética. Sendo assim, o estudo genético desta espécie possibilitará o seu manejo visando sua conservação. O objetivo deste trabalho foi construir uma biblioteca genômica enriquecida com marcadores microssatélites para a espécie florestal louro-pardo. O desenvolvimento da biblioteca propiciará futuramente o desenvolvimento de primers espécie específicos, o que subsidiará estudos de genética de populações, conservação e manejo dessa espécie. A construção da biblioteca envolveu diversas etapas laboratoriais, começando pelo protocolo de extração de DNA de louropardo. Na sequência por meio de uma eletroforese foi avaliada a qualidade do DNA obtido que apresentou integridade e condições de ser digerido. Após a amostra produzir um perfil de clivagem apropriado, foi feita a ligação com adaptadores para que cada fragmento tivesse uma terminação comum e conhecida. Os fragmentos foram amplificados para posteriormente serem ligados a um vetor de clonagem utilizado para transformar uma cepa comercial de Escherichia coli (Top 10). A confirmação da transformação com o vetor e inserto ocorreu pela presença de colônias brancas no meio de cultura, já que foi utilizado um plasmídeo onde o inserto interrompeu o gene Lac-Z, responsável por produzir a enzima b galactosidase, que em presença dos compostos IPTG e X-GAL, faz com que a coloração das colônias seja azul. Em seguida, realizou-se a manutenção dos clones (biblioteca) com a finalidade de manter as colônias em meio adequado para análises futuras. O protocolo utilizado para a construção da biblioteca genômica enriquecida com marcadores microssatélites foi aprimorado com sucesso neste trabalho e servirá de modelo para a construção de outras bibliotecas genômicas de espécies florestais de importância socioeconômica.