Análise da interação entre as proteínas EIF4E2 E e SLBP2 de Trypanosoma cruzi pelo método de crosslinking

Abstract

Resumo : A Doença de Chagas é uma doença negligenciada transmitida pelo protozoário parasita Trypanosoma cruzi, que possui um ciclo de vida complexo devido a alternância entre hospedeiro invertebrado e vertebrado, e possui diferentes formas morfológicas replicativas e infectivas. A alternância entre as distintas formas de diferenciação requer um controle preciso de sua expressão gênica de modo a se adaptar a cada hospedeiro devido as diferenças de pH, nutrição e temperatura. Esta regulação é feita principalmente por mecanismos pós-transcricionais, como o trans splicing e a poliadenilação do pré-mRNA, e principalmente na iniciação tradução pelos complexos e fatores de iniciação eucarióticos. Em tripanossomatídeos a regulação da tradução é complexa e mediada por uma quantidade maior de fatores de tradução comparada à de mamíferos. Os fatores EIF4E1-6, EIF4G1-5 e EIF4A atuam em diferentes funções na regulação da tradução. Dessa forma nesse projeto foi realizado o estudo da interação do fator de tradução EIF4E2 e a proteína SLBP2, por apresentarem potencial função na regulação gênica de tripanossomatídeos. O método de crosslinking mass spectrometry foi utilizado, revelando que a proteína EIF4E2 interage de forma significativa com a região central da SLBP2. Em mamíferos a proteína homologa a SLBP2, a SLBP, regula a expressão de mRNAs de histonas, em níveis de transcrição, transporte e tradução. Nos tripanossomatídeos a função da SLBP2 ainda é desconhecida. Estudos em Trypanosoma brucei indicaram que a SLBP2 possui uma região central - não encontrada no seu homólogo em mamíferos e altamente conservada em tripanossomatídeos - onde ocorre a interação com a EIF4E2. Ainda, a função da EF4E2 não é totalmente esclarecida, é sabido que a proteína se liga a região cap-4 de mRNAs maduros e os estudos apontam um potencial papel na regulação da expressão gênica. O presente trabalho visa elucidar a interação das proteínas EIF4E2 e SLBP2 em T. cruzi a partir dos seus sítios de interação

Abstract : Chagas disease is a neglected illness transmitted by the parasitic protozoan Trypanosoma cruzi, which undergoes a complex life cycle involving alternation between invertebrate and vertebrate hosts, exhibiting different replicative and infective morphological forms. The transition between these distinct differentiation forms necessitates precise control of gene expression to adapt to each host's varying pH, nutrition, and temperature. This regulation primarily occurs through post-transcriptional mechanisms, such as trans-splicing and polyadenylation of pre-mRNA, particularly in translation initiation by eukaryotic initiation complexes and factors. In trypanosomatids, translation regulation is intricate and involves a greater number of translation factors compared to mammals. EIF4E1-6, EIF4G1-5, and EIF4A act in various capacities in translation regulation. In this project, the interaction between the translation factor EIF4E2 and the protein SLBP2 was studied due to their potential roles in the gene regulation of trypanosomatids. The crosslinking mass spectrometry method was employed, revealing a significant interaction between the EIF4E2 protein and the central region of SLBP2. In mammals, the SLBP homolog, SLBP, regulates the expression of histone mRNAs at transcriptional, transport, and translational levels. The function of SLBP2 in trypanosomatids is still unknown. Studies in Trypanosoma brucei have indicated that SLBP2 possesses a central region absent in its mammalian homolog but highly conserved in Trypanosomatids where interaction with EIF4E2 occurs. Furthermore, the function of EIF4E2 is not fully elucidated; although it is known to bind to the cap-4 region of mature mRNAs, studies suggest a potential role in gene expression regulation. This work aims to elucidate the interaction between the EIF4E2 and SLBP2 proteins in T. cruzi based on their interaction sites