Caracterização funcional in vitro de um anticorpo que reconhece toxinas dos venenos de Loxosceles intermedia, Loxosceles laeta e Loxosceles gaucho

Abstract

Resumo : O araneísmo no Brasil configura um problema de saúde pública, devido a grande quantidade de notificações. Mais especificamente no estado do Paraná, temos em evidência as espécies Loxosceles intermedia, Loxosceles laeta e Loxosceles gaucho, pertencentes ao gênero Loxosceles. O envenenamento por tais aranhas causam sintomatologias com características dermonecróticas desencadeando resposta inflamatória na região da picada. Em casos mais severos, pode haver aparecimento de sintomas a nível sistêmico, tais como hemólise e anemia, podendo levar o indivíduo a óbito. O diagnóstico de loxoscelismo em muitos casos pode ser confundido com outras patologias de sintomatologia similar. Seu tratamento, no Brasil, se dá por meio de remédios que aliviam os processos inflamatórios desencadeados pelo veneno, ou pela administração de fragmentos de anticorpos heterólogos provenientes do soro equino anti-loxoscélico (SALOX), que em alguns casos pode induzir efeitos adversos. Os desafios acerca do mecanismo de ação, do diagnóstico e tratamento do loxoscelismo motivam muitos grupos a estudarem e desenvolverem ferramentas que possam ser empregadas para promoção de melhorias no contexto dessa patologia. Anticorpos monoclonais, produzidos pelo nosso grupo, ajudaram a elucidar as funções e interações que ocorrem entre os venenos e o seu alvo, e como podemos proteger o organismo dessas ações deletérias. O presente trabalho objetivou a caracterização de um anticorpo monoclonal murino, previamente produzido pelo nosso grupo, LimAb12, a partir da imunização com os venenos das espécies Loxosceles intermedia, Loxosceles laeta e Loxosceles gaucho. Por meio da realização de imunoensaios, foi possível confirmar o alvo específico desse anticorpo, presente nos venenos de três espécies de aranhas do gênero Loxosceles. Para melhor caracterização funcional do LimAb12 foi padronizado um ensaio de hemólise in vitro, a fim de avaliar a influência do sistema do complemento na destruição das hemácias provocada pelos diferentes venenos, assim como o potencial inibitório desse efeito, pela adição do anticorpo

Abstract : Due to the large number of notifications and cases, araneism is a public health problem in Brazil. More specifically, in the state of Paraná, there is strong evidence of the prevalence of species Loxosceles intermedia, Loxosceles laeta, and Loxosceles gaucho, all which belong to the genus Loxosceles, being the main drivers on this national health concern. Envenomation by such spiders causes symptoms with dermonecrotic characteristics, triggering an inflammatory response in the biting region. In more serious cases, symptoms, such as hemolysis and anemia may appear at the systemic level, which in severe occasions may lead to death. The diagnosis of loxoscelism can often be confused with other pathologies that present similar symptoms. Its treatment, in Brazil, is based on employing drugs that relieve the inflammatory processes triggered by the venom, or more specifically, by the administration of heterologous antibody fragments from an anti-loxoscellic equine serum (SALOX), which can, in some cases induce adverse effects. The challenges regarding the mechanism of action, diagnosis, and treatment of loxoscelism motivates many groups to study and develop tools that can be used to promote improvements in the context of this pathology. Monoclonal antibodies (mAb), produced by our group, helped to elucidate the functions and interactions that occur between their target and the venom, and how we can protect the organism from these harmful effects. The present study aimed to characterize a murine monoclonal antibody, previously produced by our group, LimAb12, from the immunization of mice with the venoms of Loxosceles intermedia, Loxosceles laeta, and Loxosceles gaucho. Through the employment of immunoassays, it was possible to confirm the specific target of this antibody, present in the venoms of the three analyzed species of the Loxosceles genus analyzed. For a better functional characterization of LimAb12, an in vitro hemolysis assay was standardized to assess the influence of the complement system on the lysis of red blood cells elicited by different venoms, as well as the mAbs inhibitory potential of this effect