Utilização de interleucina-6 e VEGF in vitro para enriquecimento de cultivo celular de células plasmáticas neoplásicas de mieloma múltiplo : um projeto piloto

Abstract

Resumo : O mieloma múltiplo (MM) é uma neoplasia hematológica caracterizada pela proliferação anormal e desregulada de células plasmáticas, que infiltram a medula óssea, e pela produção excessiva de uma paraproteína monoclonal, denominada de proteína M. Em 2020 o MM foi responsável por 117.077 óbitos, o que corresponde a uma taxa de mortalidade mundial igual a 1,1 óbitos/100 mil habitantes e foram registrados 176.404 novos casos da doença, sendo a taxa de incidência mundial igual a 1,8 casos/100 mil habitantes. É uma doença progressiva e incurável, porém, na atualidade, existem tratamentos clínicos e terapêuticos que, se iniciados precocemente, podem melhorar a qualidade de vida e sobrevida do paciente. O plano terapêutico para o MM é baseado na genética do tumor e nas condições clínicas do paciente. Nesse sentido, a análise citogenética é uma importante ferramenta diagnóstica e prognóstica de extrema relevância para a estratificação de risco em pacientes com mieloma múltiplo, auxiliando no processo de tomada de decisão em relação ao tratamento adequado e adaptado ao risco. Apesar da sua importância clínica e biológica, o poder diagnóstico da análise citogenética é limitado pelo baixo índice mitótico das células plasmáticas do MM em cultivo celular. Este trabalho propõe um novo método de enriquecimento de plasmócitos, utilizando Interleucina 6 (IL-6) e Fator de crescimento do endotélio vascular (VEGF) para enriquecer meio de cultivo, visando aumentar a porcentagem de plasmócitos na amostra. A amostragem incluiu dois casos, um paciente com suspeita de MM e um paciente com MM para análise de doença residual mínima (DRM) pós-tratamento. Os dados foram analisados por citometria de fluxo utilizando marcadores diferenciais para plasmócitos. Testes de viabilidade celular também foram conduzidos nas amostras cultivadas. As comparações foram realizadas dentro de cada caso, sempre considerando o meio de cultivo convencional como controle experimental. Não foi observado diferença na porcentagem de plasmócitos anormais no caso do paciente com suspeita de MM entre os cultivos controle, enriquecido com VEGF, enriquecido com IL-6 e enriquecido com VEGF e IL-6. Na amostra de DRM houve um aumento de plasmócitos anormais nos meios enriquecidos isoladamente com IL-6 e VEGF, conforme dados de citometria de fluxo. Foi realizado teste de viabilidade celular na amostra utilizada para o cultivo celular por citometria de fluxo e observada uma rápida perda da viabilidade celular das células plasmáticas no intervalo de tempo entre a coleta e o cultivo celular. Nossos dados abrem novas perspectivas para a construção de meios de cultivo enriquecidos com fatores de crescimento medular como uma estratégia para aumentar a eficiência do cultivo celular de plasmócitos, visando análises citogenéticas