Avaliação in vitro do efeito combinatório de naringenina com miltefosina contra Leishmania amazonensis

Abstract

Resumo: A leishmaniose é uma doença causada pelo protozoário unicelular do gênero Leishmania, sendo a forma cutânea a mais difundida no mundo, sendo uma das espécies a Leishmania amazonensis causadora de diferentes formas clínicas, como leishmaniose cutânea localizada (LCL), leishmaniose cutânea disseminada (LD) e leishmaniose cutânea difusa (LCD) no Brasil. Os medicamentos de primeira e segunda escolha mais utilizados no tratamento da leishmaniose apresentam alta toxicidade e baixa eficiência na cura dos pacientes com a forma LCD. Portanto, faz-se necessária a investigação de novas terapias utilizando compostos leishmanicidas menos tóxicos, como os flavonoides, e sua combinação com medicamentos convencionais. Neste estudo os principais objetivos foram primeiro explorar por revisão de literatura a ação in vitro de flavonoides extraídos de fontes naturais em Leishmania amazonensis além de buscar as principais metodologias empregadas para o estudo destes compostos. Outro objetivo foi combinar a miltefosina ao flavonoide naringenina para investigar um possível efeito sinérgico entre os dois compostos. Os resultados in vitro mostraram que a naringenina apresenta concentração inibitória (CI50) de 219,9 µM e miltefosina de 13,21 µM, nas análises in silico foi utilizada a regra de cinco de Linpinski’s para avaliar absorção oral de naringenina, que atende aos cinco critérios utilizados por essa análise qualitativa. Foram realizados ensaios in vitro para a construção de isobolograma que resultou nos cálculos de índice de redução de dose (DRI) e índice de concentração inibitória fracionada (FICI) que demonstraram que a combinação de naringenina com miltefosina apresenta efeito aditivo, sendo capaz de reduzir o CI50 de miltefosina em aproximadamente duas vezes nas formas promastigotas do parasita quando comparada aos ensaios in vitro do medicamento isolado. Este estudo demonstrou in vitro uma ação potencializadora do flavonoide nos ensaios in vitro de miltefosina, abrindo espaço para novas investigações sobre a associação de compostos naturais com drogas leishmanicidas

Abstract: Leishmaniasis is a disease caused by the unicellular protozoan of the genus Leishmania, with the cutaneous form being the most prevalent globally. One of the species, Leishmania amazonensis, is responsible for different clinical manifestations in Brazil such as localized cutaneous leishmaniasis (LCL), disseminated cutaneous leishmaniasis (LD), and diffuse cutaneous leishmaniasis (DCL). The first and second line drugs most commonly used in the treatment of leishmaniasis are highly toxic and show low efficacy in curing patients with the DCL form. Therefore, it is necessary to explore new therapies using less toxic leishmanicidal compounds, such as flavonoids, and their potential combinations with conventional drugs. In this study the main objectives were first to explore by literature review the in vitro action of flavonoids extracted from natural sources in Leishmania amazonensis and seek the main methodologies used for the study of these compounds. Another objective was to investigate the potential synergistic effect between miltefosine and the flavonoid naringenin. In vitro results indicated that naringenin has an inhibitory concentration (IC50) of 219.9 µM and miltefosine has an IC50 of 13.21 µM. In the in silico analysis, Lipinski's rule of five was applied to assess the oral absorption of naringenin, which met all five criteria for this qualitative analysis. In vitro tests were conducted to construct an isobologram, resulting in the calculation of the dose reduction index (DRI) and fractional inhibitory concentration index (FICI), which demonstrated that the combination of naringenin with miltefosine produced an additive effect. This combination was able to reduce the IC50 of miltefosine by approximately two fold in the promastigote forms of the parasite, compared to the in vitro tests of the drug alone. This study demonstrated a potentiating effect of the flavonoid in combination with miltefosine in vitro, paving the way for future investigations on the association of natural compounds with leishmanicidal drugs