Hemólise como uma ferramenta para o estudo de venenos loxoscélicos

Abstract

Resumo: Envenenamentos causados por aracnídeos representam um sério problema de saúde, e aranhas pertencentes ao gênero Loxosceles representam o maior número de notificações na região sul do Brasil. Em específico, no estado do Paraná, destacam-se três espécies, Loxosceles intermedia, Loxosceles gaucho e Loxosceles laeta. Tais aranhas têm a capacidade de inocular poucos microlitros de veneno que, por sua vez, consistem em uma mistura de proteínas com características e funções distintas. A sintomatologia desencadeada pelo envenenamento pode variar, em alguns casos apresenta características dermonecróticas em decorrência a resposta inflamatória na região da picada, ou ainda, em condições mais severas, ocorre o aparecimento de sintomas a nível sistêmico, tais como hemólise e anemia, podendo levar o indivíduo a óbito. A hemólise é um dos efeitos deletérios do envenenamento e está associada com a ação das fosfolipases-D presentes no veneno. Ao entrar em contato com os fosfolipídios presentes na membrana celular dos eritrócitos, os hidrolisa causando uma desorganização, e em sinergismo com os outros componentes, levam à lise celular. Alguns grupos de pesquisas ainda demonstraram a participação do sistema do complemento na hemólise, como também na exacerbação do processo inflamatório. Para a avaliação in vitro destes processos são realizados testes nos quais eritrócitos humanos são incubados com o veneno na presença ou não de soro humano. No entanto, existem algumas discrepâncias entre protocolos utilizados e estabelecidos atualmente. Para uma melhor avaliação das ações deletérias do veneno foram adaptados protocolos preestabelecidos na literatura resultando um novo protocolo adaptado a partir dos já existentes. Nesse sentido, dada a importância da hemólise no contexto do loxoscelismo, o presente trabalho objetiva avaliar a influência de diferentes parâmetros envolvidos na lise dos eritrócitos in vitro, para a obtenção de protocolos reprodutíveis. A padronização de tais protocolos permitirá o emprego dos mesmos, não apenas para confirmar o potencial neutralizante de anticorpos monoclonais previamente produzidos pelo grupo, como também, para avaliar a relação da suscetibilidade aos componentes do veneno em relação aos diferentes tipos sanguíneos testados (ABO).

Abstract: Envenomation caused by arachnids represents a serious health problem, given spiders of the genus Loxosceles represent the highest number of notifications in southern Brazil. In Paraná, three species stand out, Loxosceles intermedia, Loxosceles gaucho, and Loxosceles laeta. Such spiders can inoculate a few microliters of venom which consists of a mixture of proteins with distinct enzymatic characteristics and functions. The symptomatology triggered by the envenomation may vary. In some cases, it presents dermonecrotic characteristics due to the inflammatory response in the bite area, or even, in more severe conditions, the appearance of symptoms at a systemic level, such as hemolysis and anemia, which can lead to death. Hemolysis is one of the deleterious effects of envenomation and is associated with the action of phospholipases-D present in the venom. When in contact with the phospholipids present in the cell membrane of the erythrocytes, phospholipases-D hydrolyze them causing membrane disorganization, and synergism with the other components, leading to cell lysis. Some research groups have even demonstrated the participation of the complement system in hemolysis, as well as in the exacerbation of the inflammatory process. For the in vitro evaluation of these processes, tests in which human erythrocytes are incubated with venom in the presence or absence of human serum are performed. However, there are some differences between currently used and established protocols. Thus, for a better evaluation of the deleterious actions of the venom, pre-established protocols in the literature were adapted and a new protocol was suggested from the existing ones. Therefore, given the importance of hemolysis in the context of loxoscelism, the present study aims to evaluate the influence of different parameters involved in the in vitro lysis of erythrocytes, to obtain reproducible protocols. The standardization of such protocols will allow their users to confirm the neutralizing potential of monoclonal antibodies previously produced by our group, as well as to evaluate the relationship of susceptibility to the venom components in relation to the different blood types tested (ABO).