Papel de RECK e Notch na responsividade terapêutica em modelo de glioblastoma humano

Abstract

Resumo : entre as neoplasias que acometem o Sistema Nervoso Central, o glioblastoma IDH-selvagem (GBM) ¢ o tumor cerebral primério mais incidente em adultos, com alto grau de malignidade, agressividade e extensa heterogeneidade. O regime terapéutico atual consiste em quimioterapia com temozolomida (TMZ), radioterapia e, se possivel, remoção cirargica. Porém, a grande resisténcia das células tumorais frente a ação do quimioterapico é bastante evidente, o que resulta em uma expectativa de vida média dos pacientes de 15 meses. Diante disso, a agdo de farmacos adjuvantes tém sido importante foco de pesquisa na area. Nesse aspecto, destaca-se a sinvastatina (SVA), uma droga conhecida por sua ação antilipémica, que tem sido explorada no nosso grupo como moduladora do crescimento e invasao tumoral, capaz de potencializar o efeito citotoxico promovido pela TMZ. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar o envolvimento do gene RECK e a via de sinalizagdo de Notch na responsividade promovida pelos tratamentos de TMZ e SVA em células da linhagem U87MG de glioblastoma humano. Para tanto, foram utilizadas células de glioblastoma humano da linhagem U87MG com superexpressdo da forma candnica de RECK, seu variante de splicing RECKvar3 ¢ o vetor controle contendo EGFP, tratadas com 100uM de TMZ e 1uM de SVA de forma isolada e/ou combinada, além das condig¢des controle (veiculos DMSO e EtOH) por 72h. Foram realizados ensaios de avaliagdo da atividade metabolica por redução de tetrazolio (MTT) e analise da expressdo génica por RT-qPCR, tendo por alvos moleculares os transcritos de NOTCHI e HESI. Os resultados indicam que os tratamentos com os diferentes agentes promoveram redugdo da viabilidade nas células US7MG e, de forma interessante, a superexpressao de RECKvar3 reduziu a sensibilidade da linhagem U87MG após tratamento com TMZ, corroborando com demais ensaios realizados recentemente em nosso laboratério que sugerem uma agdo pro-tumoral dessa variante. Adicionalmente, ambos os farmacos promoveram aumento dos niveis relativos de mRNA de NOTCHI e HESI na linhagem controle (U§7MG- EGFP). A superexpressdo de RECK suprimiu os niveis de mRNA dos dois alvos, ao passo que RECKvar3 elevou os niveis relativos de mRNA de NOTCHI e HESI somente na condição tratada com TMZ. Deste modo, estes dados em conjunto sugerem que o balango entre RECK/RECKvar3 esta envolvido na responsividade e resisténcia a TMZ, bem como modula os niveis de mRNA de genes da via de NOTCH