Avaliaçao da sensibilidade e especificidade da metodologia de enzimaimunoensaio com micropartículas para a dosagem de ferritinas

Abstract

Resumo: A deficiência de ferro é uma das alterações nutricionais mais comumente observada nos seres humanos, apresentando um espectro entre a depleção sem comprometimento fisiológico, até a anemia com inúmeras consequências nos mais variados órgãos e sistemas. A ferritina é a principal proteína envolvida no armazenamento de ferro, sendo encontrada no meio intracelular e também como um constituinte normal do plasma, fluídos corporais e das hemácias circulantes. Ferritinas derivadas de diferentes tecidos apresentam distintas propriedades como: estrutura primária, teor de fosfato no núcleo mineral, mobilidade eletroforética e proporção relativa de subunidades H e L, determinando diferenças estruturais, imunológicas, em ponto isoelétrico e capacidade oxidativa. Estudos demonstram a relação direta entre a concentração de ferritina no soro e os estoques de ferro nos tecidos. A síntese de ferritina plasmática pode ser estimulada por citoquinas, sendo que níveis séricos apresentam-se aumentados em pacientes com doenças inflamatórias, comprometendo a avaliação dos níveis reais de ferro intracelular. Os sistemas comerciais disponíveis para a dosagem de ferritina plasmática nos laboratórios clínicos, estão baseados em ensaios imunoenzimáticos utilizando anticorpos antiferritina específicos ligados à enzimas. Alguns agentes quelantes ou redutores, sendo muitos destes medicamentos, têm capacidade de liberar ferro da ferritina e também de ligar-se à estrutura proteica, promovendo possíveis alterações estruturais, inclusive do sítio antigênico, o que poderia, no caso da ferritina, afetar o reconhecimento pelos anticorpos. Neste trabalho avaliamos se a metodologia de enzimaimunoensaio com micropartículas (MEIA), do sistema ASXYM - Abbott Laboratories, quantifica adequadamente ferritinas em função do tecido de origem (baço, fígado e coração), e se alguns medicamentos, especialmente de uso prolongado, podem influenciar na metodologia. Os resultados das dosagens de ferritinas teciduais indicaram especificidade e sensibilidade para ferritina de baço (93 a 100 %), porém não quantificando adequadamente as ferritinas de fígado (10 %) e coração (0 %). No estudo de possível interferência causada por medicamentos (nitrofurantoína, metronidazol, paracetamol, aciclovir e ciprofloxacina), observou-se que em concentrações específicas de fármaco e proteína ocorre interferência significativa da ciprofloxacina na metodologia e, como consequência, nos resultados.

Abstract: Iron deficiency is the most common nutritional human disorder, and its clinical manifestations range from slight abatement to severe features. Ferritin is the main protein envolved in iron storage, and it is also found in plasma. There are tissue specific ferritins, with different properties as primary structure, phosphate ratio at mineral core, electrophoretic mobility, variable proportion of H and L monomers, which lead to different structural, immunological, isoelectric point and oxidation activity characteristics. Studies exhibited a direct relation between plasmatic ferritin concentration and tissue storage. The plasmatic ferritin synthesis may be stimulated by inflammatory cytokines, which may mislead the true tissue iron concentration. The ferritin measurement is based upon enzymatic immunoassays using specific antiferritin antibodies linked to enzymes. This present work intended to evaluate the microparticle enzyme immunoassay (MEIA) in measuring ferritin concentration from different origins as spleen, liver and heart, as well as trying to check whether some drugs may affect the results. The ferritin tissue measurement data disclosed, using this method, high specificity to spleen ferritin (93 to 100 %), moderate to liver ferritin (10 %) and absence to heart ferritin (0 %). The study showed no interference for drugs used in this work: nitrofurantoin, metronidazole, paracetamol and acyclovir but suggests that in specific concentrations and incubation time ciprofloxacin did affect the results.