Expressão gênica diferencial de crustina em hepatopâncreas do camarão Penaeus vannamei após desafio bacteriano

Abstract

Resumo : O presente trabalho teve como objetivo analisar e detalhar o perfil transcricional de um gene associado à produção de peptídeo antimicrobiano em camarões Penaeus vannamei após a injúria séptica provocada pela bactéria Aeromonas hydrophila. A imunocompetência dos animais parece ser significativamente reduzida devido ao estresse ambiental causado por contaminantes. Os peptídeos antimicrobianos desempenham um papel fundamental na primeira barreira de defesa do organismo em diversas espécies animais. Entre esses peptídeos, as crustinas destacam-se como a maior e mais diversificada família de PAMs em crustáceos. A A. hydrophila é um agente causador de doenças zoonóticas. Para análises do desafio imunológico foi testada a resposta de um grupo de adultos de P. vannamei. As amostras deste grupo foram avaliadas em triplicata nos tempos 0, 12 e 24 horas. O RNA total foi extraído dos hepatopâncreas utilizando o kit de extração SV Total RNA Isolation (Promega). A síntese do cDNA foi feita através da concentração de RNA total extraído, padronizada uma concentração de aproximadamente 100 ng de RNA, para todas as amostras testadas. Para a análise da expressão da Crustina foram utilizados primers de análise da expressão gênica da Crustina, tipo III. O cDNA sintetizado foi amplificado pela Reação em Cadeia da Polimerase (Polymerase Chain Reaction, PCR) convencional, as amostras de cDNA foram também amplificadas, com os mesmos primers, por PCR quantitativa (qPCR). Os melhores resultados obtidos no tempo 24 horas, com um aumento de duas vezes a mais em comparação aos não desafiados, já no tempo 12 horas houve aumento de 0,5% comparado com os não desafiados.