Avaliação de alguns parametros metabolicos de celulas HeLa e efeito do metotrexato

Abstract

Resumo: A permeabilização de células HeLa com digitonina possibilitou a caracterização de parâmetros do metabolismo mitocondrial in situ, bem como a avaliação dos efeitos do metotrexato sobre este metabolismo. mitocondrias de células Verificou-se que HeLa utilizam os substratos succinato,2-oxoglutarato e isocitrato, e que o metotrexato inibe parcialmente a utilização dos dois substratos NAD-dependentes. A droga inibiu a 2-oxoglutarato desidrogenase e a isocitrato desidrogenase. A utilização de malato por células intactas foi acompanhada pela produção de piruvato, indicando a participação da enzima málica na utilização deste substrato. Demonstrou-se a presença da enzima málica nas frações citossólica e mitocondrial, bem como a sua inibição pelo metotrexato. Adições sucessivas de cálcio à preparação de células permeabi1izadas demonstraram que as mitocondrias de células HeLa possuem uma elevada capacidade de captar e acumular o cátion, sem sinais de desestruturação. O metotrexato inibiu discretamente a velocidade de captação, bem como a capacidade de acúmulo máximo. A captação do cálcio em células HeLa induziu um estímulo cíclico da respiração e da ejeção de prótons, também inibidos pelo MTX. Verificou-se que o influxo do cálcio em mitocondrias de células HeLa foi apenas parcialmente inibido pelo vermelho de rutenio. Os resultados sugerem que na situação experimental deste trabalho pode ocorrer um aumento na concentração de cálcio citossólico, sob efeito do metotrexato.