Estudo de moléculas híbridas de tetrahidroquinolina/4,5-dihidroisoxazol como inibidores do transportador MRP1
Resumo
Resumo: O câncer é uma questão de saúde pública a nível mundial. Um dos principais desafios do tratamento do câncer é a resistência multidrogas (MDR), causada por vários fatores, incluindo a superexpressão de transportadores de ABC. Estas proteínas transmembrana atuam como bombas de efluxo expelindo o quimioterápico para fora das células. Os três principais transportadores ABC são a glicoproteína P (P-gp), codificada por ABCB1, MRP1 (proteína de resistência multidrogas 1), codificada por ABCC1, e BCRP (proteína de resistência ao câncer de mama), codificada por ABCG2. A estratégia mais promissora para superar a MDR mediada pelos transportadores ABC é o uso de inibidores. Assim, o objetivo deste estudo foi identificar e caracterizar novos inibidores da MRP1. Foi realizado um screening com 16 derivados de tetrahidroquinolina/4,5-dihidroisoxazoles (A1 - D4). Esses compostos foram avaliados como inibidores de MRP1 em células transfectadas de maneira estável, superexpressando o transportador MRP1 (BHK21-MRP1). A linhagem celular parental (BHK-21) foi utilizada como controle. Em relação à capacidade de inibir o efluxo mediado por MRP1, os compostos A1 e D1 apresentaram os melhores resultados (IC50 de 0,58 e 2,74 µM, respectivamente). Além disso, ambos os inibidores apresentaram baixa citotoxicidade e não foram transportados por MRP1. Considerando a razão terapêutica (RT) (citotoxicidade/inibição), o composto A1 foi o mais promissor, mostrando um RT superior a 170, considerado um indicativo positivo para estudos posteriores. Uma análise de docking molecular revelou o local de ligação de MRP1 com esses inibidores, o qual é diferente do substrato calceína. Estes dados foram confirmados pela inibição não competitiva. Finalmente, A1 e D1 confirmaram a capacidade da inibição uma vez que melhoraram o efeito dos quimioterápicos (etoposideo e daunorubicina) em células que superexpressam MRP1. Juntos, esses resultados demonstraram o potencial do composto A1 em seguir em estudos pré-clínicos. Abstract: Cancer is a public health issue worldwide. One of the major challenges of cancer treatment is the multidrug resistance (MDR), caused by several factors, including the overexpression of ABC transporters. These transmembrane proteins act as efflux pumps expelling the chemotherapy outside of cells. The three main ABC transporters are P-glycoprotein (P-gp), encoded by ABCB1, MRP1 (multidrug resistance protein 1), encoded by ABCC1, and BCRP (breast cancer resistance protein), encoded by ABCG2. The most promising strategy to overcome MDR mediated by ABC transporters is the use of inhibitors. Thus, the goal of this study was to identify and characterize new inhibitors of MRP1. A screening with 16 tetrahydroquinoline/4,5- dihydroisoxazole derivatives (A1 - D4) was performed. These compounds were evaluated as MRP1 inhibitors in stably transfected cells overexpressing MRP1 (BHK21-MRP1). The parental cell line (BHK-21) was used as a control. Regarding the ability to inhibit the efflux mediated by MRP1, compounds A1 and D1 showed the best results (IC50 of 0.58 and 2.74 µM, respectively). In addition, both inhibitors showed low cytotoxicity and were not transported by MRP1. Considering the therapeutic ratio (TR) (cytotoxicity/inhibition), compound A1 was the most promising, showing a TR higher than 170, considered a positive indicative for further studies. A molecular docking analysis revealed the MRP1 binding site for these inhibitors, that is different from the substrate calcein. This data was confirmed by the noncompetitive inhibition. Finally, A1 and D1 confirmed the inhibition ability since they improved the effect of chemotherapeutics (etoposide and daunorubicin) in cells overexpressing MRP1. Together, these results demonstrated the potential of A1 to follow in pre-clinical studies.
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