Expressão de RNA de proteínas do cloroplasto de trigo (Triticum aestivum VAR. LINI) cultivado in vitro na ausência de nitrogênio e na presença da bactéria Herbaspirillum seropedicae SmR1

Abstract

Resumo : O nitrogênio (N) é um dos principais determinantes da produtividade da cultura do trigo, um dos maiores desafios enfrentados pela agricultura. E o uso de bactérias promotoras de crescimento vegetal (BPCV)é uma forma de melhorar os índices de nitrogênio nas plantas. A aplicação de análises proteômicas em trigo tem sido realizada amplamente para avaliar as condições fisiológicas da planta e foi estudado por nosso grupo de pesquisa, os efeitos da ausência de N e/ou co-cultivo com a BPCV, Herbaspirillum seropedicae no meio de cultivo. Nesses estudos proteínas específicas do sistema antioxidante e dos fotossistema foram observadas, indicando respostas específicas quanto às variedades estudadas e a presença da bactéria. Entretanto análises da expressão gênica através dos níveis de RNA mensageiro (mRNA), são ferramentas que podem corroborar nos estudos sobre a função dos sistemas biológicos. O objetivo desse trabalho foi realizar a quantificação da expressão do RNAm de proteínas identificadas como presentes por análise proteômica nas folhas de 2 variedades de trigo quando co-cultivadas na presença de, H. seropedicae. A expressão dos genes psbA, psaA, GSA e PPL1 nos diferentes ensaios foi avaliada por RT-qPCR, juntamente com o gene referência ACT1. Após a extração do RNA total das folhas de trigo, foi obtido o cDNA e a amplificação foi realizada por PCR em tempo real. A integridade dos produtos de PCR foi checada por eletroforese em gel de agarose. A expressão gênica relativa foi calculada pela fórmula 2-??Ct, em que o gene alvo é normalizado com a expressão do gene referência (Actina), e na sequência comparado ao grupo controle. Os resultados para o gene GSA corroboraram com dados proteômicos, enquanto que a expressão para os genes psaB, psaA e ppl1 foram opostos ao estudo realizado. A partir dos expressos avaliados é possível indicar que ausência de nitrogênio (condições SN e SNI) para a cv. CD 104 são situações de estresse que levam a menor atividade de expressão dos genes relacionados a fotossíntese. Ao contrário da cv. CD 120, que aparentemente está mais ativa em nos fotossistemas e na sua recuperação.