Análise de expressão em planta de genes dependentes de TtsI de Sinorhizobium fredii NGR234

Abstract

Resumo : Sinorhizobium fredii NGR234 é um microrganismo fixador de nitrogênio, capaz de reconhecer flavonóides liberados por diversas plantas. Após o reconhecimento se estabelecem relações simbióticas entre planta e bactéria, culminando na formação de nódulos radiculares fixadores de nitrogênio. O Sistema de Secreção Tipo III (TTSS ou T3SS) é um dos fatores que afetam a formação dos nódulos simbióticos em linhagens de rizóbios. TTSS é um importante fator de virulência em bactérias Gram-negativas, pois permitem que proteínas efetoras bacterianas sejam translocadas para dentro do citoplasma das células do hospedeiro, onde modulam diversas funções biológicas, como expressão gênica, progressão do ciclo celular e funções bioquímicas. Em NGR234 estas proteínas efetoras são expressas em resposta a uma cascata regulatória controlada por flavonóides. A transcrição dos genes codificadores é ativada diretamente pelo regulador TtsI que reconhece os alvos por se ligar a tts-boxes (sendo onze no total). Este trabalho teve por objetivo avaliar o perfil de expressão de genes tts in vivo, durante todo o processo de nodulação. Para tanto, foram analisados seis tss-boxes (TB1, TB4, TB6, TB8, TB9 e TB11) fusionados ao gene gfp sem promotor e os níveis de expressão de GFP foram acompanhados no desenvolvimento de nódulos nas plantas Phaseolus vulgaris e Vigna unguiculata infectadas com NGR234. Verificou-se que a expressão de GFP ocorreu em todas as fases de desenvolvimento do nódulo, desde o início da infecção da planta pela bactéria. Os tts-boxes mais expressos em Vigna unguiculata foram: TB6, TB8, TB1, TB11, TB9 e TB4, respectivamente, enquanto em Phaseolus vulgaris foram: TB8, TB9, TB6, TB11, TB1 e TB4, respectivamente