Análise proteômica das estirpes selvagem, ntrC- e nifA- de Herbaspirillum seropedicae

Abstract

Resumo: O termo "proteoma" refere-se ao conjunto de proteínas expressas por uma célula em uma determinada condição fisiológica. Foi realizada análise proteômica da estirpe selvagem (SMR1) e das estirpes mutantes SMR54 (nifA-) e DCP286A (ntrC-) de Herbaspirillum seropedicae. As proteínas foram fracionadas por meio de eletroforese bidimensional. A isoeletrofocalização foi realizada em tiras com gradiente imobilizado de pH nas faixas de pH 4 a 7 e pH 3 a 10 e a eletroforese na presença de SDS foi realizada em géis de poliacrilamida 12,5%. Foram realizadas análises da estirpe selvagem na condição de fixação de nitrogênio cultivada em baixo amônio (2mmol/L de NH4Cl) ou em alto amônio (20mmol/L de NH4Cl). Para as estirpes mutantes, incapazes de fixar nitrogênio, foram realizadas análises na condição de baixo amônio e alto amônio. Na estirpe selvagem (SMR1) ocorreu indução de 25 proteínas na condição de fixação de nitrogênio quando comparada com a mesma estirpe cultivada em alto amônio (20mmol/L de NH4Cl). Em condição de alto amônio foram induzidas 12 proteínas na estirpe mutante SMR54 (nifA-) e não ocorreu indução de nenhuma proteína na estirpe mutante DCP286A. Em condição de baixo amônio 3 proteínas foram induzidas na estirpe selvagem, 8 no mutante SMR54 e nenhuma no mutante DCP286A quando comparados com a estirpe selvagem nas mesmas condições. Um grande número de proteínas foi reprimido na condição de fixação de nitrogênio e baixa amônia na estirpe SMR1 e nos mutantes nas duas condições estudadas. As proteínas reprimidas no mutante SMR54 foram reprimidas também no mutante DCP286A porém, no último ocorreu repressão de um número maior de proteínas. Vinte e nove proteínas induzidas na estirpe SMR1 em condição de fixação de nitrogênio ou no mutante SMR54 cultivado em alto amônio (20mmol/L de NH4Cl) foram submetidas a espectrometria de massa utilizando MALDI-ToF, entretanto, os dados provenientes das massas trípticas não foram suficientes para sua identificação.