Avaliação da qualidade microbiológica e parasitológica da água de irrigação, hortaliças orgânicas e minimamente processadas destinadas ao consumo humano em Curitiba, Paraná

Abstract

Resumo: A produção de alimentos orgânicos está associada a um modelo de desenvolvimento sustentável. As doenças transmitidas por alimentos (DTA) representam um importante problema de saúde pública. Observa-se escassez de dados acerca da contaminação por parasitos em hortaliças provenientes de cultivo orgânico e, são ainda mais escassos dados acerca da contaminação e caracterização molecular de protozoários patogênicos em vegetais prontos para o consumo. O principal objetivo desse estudo foi realizar o monitoramento da contaminação por helmintos, protozoários patogênicos e bactérias indicadoras de contaminação fecal (BICF) em diferentes etapas da cadeia produtiva de hortaliças orgânicas e, em vegetais minimamente processados em Curitiba/PR. Três grupos foram eleitos para a análise de patógenos e BICF: Grupo I - água de irrigação de hortaliças cultivadas em Rio Branco do Sul/PR, em três diferentes pontos amostrais e, em água de lavagem dos vegetais (ALV) (Cryptosporidium spp., Giardia spp., helmintos, Escherichia coli e Enterococcus sp.), Grupo II - alfaces de feiras-livres de orgânicos da capital, oriundas da mesma região produtora (helmintos e outros protozoários intestinais) e, Grupo III - hortaliças minimamente processadas de dois produtores analisadas em forma de pool (n=10 amostras/pool) (protozoários, helmintos e BICF). O isolamento de oocistos de Cryptosporidium e cistos de Giardia em amostras hídricas foi realizado pela técnica de filtração em membranas seguido de Reação de Imunofluorescência Direta (RID) e, BICF pelo método de substrato cromogênico - Colilert® e Enterolert®. A contaminação por parasitos em hortaliças de feiras livres e prontas para o consumo foi realizada através da lavagem das folhas com glicina (1M), seguida de centrifugação para obtenção de sedimentos, sendo estes analisados por microscopia óptica e RID, respectivamente. Em adição, para o Grupo III a contaminação por Giardia duodenalis também foi aferida mediante amplificação de quatro marcadores moleculares por Nested-PCR. A contaminação por pelo menos um dos protozoários foi identificada em 40% das amostras de ALV, assim como a presença de cistos de Balantioides coli, em igual proporção. BICF foram detectadas em todas as amostras do Grupo I, sendo as maiores concentrações de contaminação evidenciadas para Enterococcus sp. Para o Grupo II, 16,3% das amostras apresentaram contaminação por parasitos, sendo a maior prevalência detectada para cistos de Balantioides coli, seguida da contaminação por ovos da família Ancylostomatidae, Ascaris spp., Trichuris sp., e Hymenolepis nana em igual proporção. A contaminação por Giardia foi evidenciada em 25% dos pool de amostras do Grupo III de ambos os produtores, por técnicas imunológicas ou moleculares, sendo as maiores taxas de contaminação evidenciadas para o produtor I. Giardia duodenalis foi identificada em ambos os produtores de hortaliças prontas para o consumo e o grupo genético B, identificado em dois pool de amostras do produtor I. Este é o primeiro relato da contaminação por G. duodenalis pertencente a um grupo genético com potencial infectante para seres humanos em hortaliças prontas para o consumo no Brasil. Reitera-se a relevância do monitoramento de diferentes pontos críticos da cadeia produtiva, visando a minimização da ocorrência de DTA e seus impactos em saúde pública.

Abstract: The production of organic food is associated with a sustainable development model. Foodborne diseases represent an important public health problem. There is a lack of contamination data of parasites in vegetables from organic cultivation, and data concerning the contamination and molecular characterization of pathogenic protozoa in Ready-to-Eat (RTE) salads, are even scarcer or inexistent. The main goal of the present study was to perform the monitoring of helminths, pathogenic protozoa, and fecal indicator bacteria (FIB) in different stages related with the food chain of organic vegetables, and in RTE salads in Curitiba/PR. For this, three groups were elected for the analysis of pathogens and FIB: Group I - irrigation water of vegetables from organic farming in the city of Rio Branco do Sul/PR, from three different sampling sites and, in washing vegetables water (WVW) (Cryptosporidium spp., Giardia spp., helminths, Escherichia coli and Enterococcus sp.), Group II - lettuce from organic open fairs in the capital, from the same cultivation region (helminths and other intestinal protozoa) and, Group III - RTE pooled packages from two producers (n=10 samples/pool) (protozoa, helminths and FIB). The isolation of Cryptosporidium oocysts and Giardia cysts from water samples was performed by the membrane filtration technique followed by Direct Immunofluorescence assay (IFA) and FIB by the chromogenic substrate method Colilert® and Enterolert®. The contamination by parasites in vegetables from open markets and RTE vegetables was carried out by washing the leaves with glycine (1M) followed by centrifugation to obtain pellets, which were analyzed by optical microscopy and IFA, respectively. Moreover, the contamination by Giardia duodenalis was also measured by amplification of four molecular markers by Nested-PCR. Contamination by at least one of the protozoa was identified in 40% of the WVW samples, as well as the presence of Balantioides coli cysts, in equal proportion. FIB were detected in all samples of Group I, with the highest concentrations of contamination being evidenced for Enterococcus sp. For Group II, 16.3% of the samples exhibited contamination by parasites, with the highest prevalence rate detected for Balantioides coli cysts, followed by the contamination of eggs of Ancylostomatidae family, Ascaris spp., Trichuris sp., and Hymenolepis nana on the same proportion. Contamination by Giardia was detected in 25% of the RTE pooled samples from both producers by immunological or molecular techniques, with the highest rates of contamination evidenced for producer I. Giardia duodenalis was identified in both producers of RTE vegetables, being the genetic group B identified in two pools of samples from the producer I. This is the first report of contamination by Giardia duodenalis belonging to a genetic group with infective potential for humans in RTE vegetables in Brazil. The results highlights the importance of monitoring different critical points in the vegetables production chain, aiming to minimize the occurrence of foodborne diseases and their impacts on public health.