Efeito do metotrexato sobre o transporte mitocondrial de cálcio, a lançadeira malato-aspartato e alguns metabólitos de células HeLa

Abstract

Resumo: Estudou-se o efeito do MTX sobre o transporte mitocondrial de cálcio, usando-se mitocôndrias isoladas de fígado de rato. Em concentrações entre 0,4 e 1,6 umoles de MTX.mg-1 de proteína mitocondrial, observou-se redução do influxo e aumento do efluxo de Ca2+ , progressivos, de ate 20%. Ao ser avaliada a ação da droga sobre a lançadeira malato-aspartato, notou-se que a oxidação do malato, em mitocôndrias intactas de fígado de rato, foi 30% inibida durante os estados III o IV, em concentrações de MTX acima de 0,5 umoles.mg-1 de proteína mitocondrial. Os sistemas enzimáticos MDH/GOT e MDH purificada, foram 100% inibidos em concentrações de 0,5mM e 0,34mM de MTX, respectivamente. A MDH mitocondrial, na presença de FCCP e rotenona, mostrou-se 100% inibida pela droga em concentrações acima de 0.35 umoles de MTX.mg-1 de proteína mitocondrial. Em células HeLa, a lançadeira malato-aspartato foi avaliada através do acumulo de piruvato, proveniente da oxidação de lactato adicionado, na presença de inibidores da via glicolitica (fluoreto) e do ciclo de Krebs (malonato). O acúmulo de piruvato foi totalmente inibido pelo amino-oxiacetato, e 73% inibido na presença de rotenona, comprovando que celulas HeLa usam preferencialmente a lançadeira malato-aspartato para o transporte de equivalentes redutores para as mitocôndrias. O MTX (0,4mM) inibiu o acumulo de piruvato cm 44%, devido a sua ação sobre as enzimas 1.DH e MDH. Incubando-se por 30 minutos células HeLa com MTX (0,4mM), na presença de lmM de glucose, notou-se, em relação ao controle som droga: acumulo de ADP e diminuição de ATP, de 20%, com aumento da relação ADP/ATP; acumulo de NAD+ e decréscimo de NADH de 15%, com diminuição da razão NADH/NAD+ ; decréscimo de NADPH, de 14%, com redução da razão NADPH/NADP+ ; acumulo de 26% de piruvato, e decréscimo de 33% na produção de lactato, com diminuição da razão lactato/piruvato.