Análise do potencial antibacteriano e triagem micoquímica do extrato aquoso do cogumelo Macrocybe titans

Abstract

Resumo: O cogumelo basidiomicete Macrocybe titans foi reportado recentemente no Brasil despertando interesse científico. Na literatura, há poucos relatos quanto ao potencial antimicrobiano e micoquímico do macrofungo. Com base nisto, o presente trabalho teve por objetivo verificar a atividade antibacteriana do extrato aquoso do cogumelo M. titans e verificar seus efeitos bactericida e/ou bacteriostático e triagem micoquímica. A linhagem do macrofungo utilizado foi o M. titans, pertencente ao banco de germoplasma do Núcleo Experimental de Micologia Aplicada (NEMA), da Universidade Federal do Paraná - UFPR, Setor Palotina, Paraná. Os microrganismos utilizados foram cepas ATCC de Bacillus cereus 10876, Salmonella Typhimurium 14028, Salmonella Enteritidis 13076, Listeria monocytogenes 19111, Escherichia coli 25922, Escherichia coli O157:H7 43888, Pseudomonas aeruginosa 27853, Staphylococcus aureus 6538, Bacillus subtilis subespécie spizizenii 6633 e Klebsiella pneumoniae 13883. Para obtenção do extrato aquoso o basidioma seco do cogumelo foi triturado, diluído, mantido em repouso a 4ºC e filtrado. As cepas foram reativadas e a padronização dos inóculos foi realizada de acordo com a escala de McFarland de 0,5 e ajustada em espectrofotometria. Diluições foram realizadas a fim de obter a concentração de trabalho. O teste de susceptibilidade dos microrganismos foi realizado pela técnica de microdiluição em caldo utilizando uma placa de 96 poços com a finalidade de avaliar a concentração inibitória mínima (CIM) do extrato aquoso. Todas as cepas testadas apresentaram efeito inibitório e os melhores resultados foram para as bactérias Gram negativas P. aeruginosa e S. Enteritidis, e Gram positivas L. monocytogenes, B. spizizenii e S. aureus apresentaram efeito inibitório na com 0,78% (0,9765 mg/mL) do extrato. Através da concentração bactericida mínima (CBM) e do teste de susceptibilidade antibacteriana por disco-difusão foi possível confirmar a bioatividade do extrato em relação às cepas bacterianas testadas. Todas as cepas testadas apresentaram halos de inibição, no entanto, os melhores resultados observados foram para S. aureus e K. pneumoniae, apresentando tamanho médio de 18,25 e 14,38 mm, respectivamente. S. aureus e P. aeruginosa, foram analisadas através de Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV), onde foi possível observar a diminuição evidente no número de células sem nenhuma alteração aparente na morfologia das bactérias.

Abstract: The basidiomycete mushroom Macrocybe titans was recently reported in Brazil, arousing scientific interest. In the literature, there are no reports on the antimicrobial and mycochemical potential of the macrofungus. Based on this, the present work aimed to verify the antibacterial activity of the aqueous extract of the mushroom M. titans and verify its bactericidal and/or bacteriostatic effects and mycochemical screening. The lineage of the macrofungus used was M. titans, belonging to the germplasm bank of the Experimental Nucleus of Applied Mycology (NEMA), at the Federal University of Paraná - UFPR, Setor Palotina, Paraná. The microorganisms used were ATCC strains of Bacillus cereus 10876, Salmonella Typhimurium 14028, Salmonella Enteritidis 13076, Listeria monocytogenes 19111, Escherichia coli 25922, Escherichia coli O157:H7 43888, Pseudomonas aeruginosa 27853, Staphylococcus aureus 6538, Bacillus subtilis subspecies Spizizinni 6633 and Klebsiella pneumoniae 13883. To obtain the aqueous extract, the dried mushroom basidioma was crushed, diluted, kept at rest at 4ºC and filtered. The strains were reactivated and the inoculum standardization was performed according to the 0.5 McFarland scale and adjusted in spectrophotometry. Dilutions were carried out in order to obtain the working concentration. The microorganism susceptibility test was performed using the broth microdilution technique using a 96-well plate in order to assess the minimum inhibitory concentration (MIC) of the aqueous extract. Through a visual analysis, all tested strains showed an inhibitory effect and the best results were for the Gram negative bacteria P. aeruginosa and S. Enteritidis, and Gram positive L. monocytogenes, B. spizizenii and S. aureus showed an inhibitory effect on column 8 with 0.78% (0.9765 mg/ml) of the extract. Through the minimal bactericidal concentration (CBM) and the antibacterial susceptibility test by diskdiffusion it was possible to confirm the bioactivity of the extract in relation to the bacterial strains tested. All strains tested showed inhibition halos, however, the best results were observed for S. aureus and K. pneumoniae, with an average size of 18.25 and 14.38 mm, respectively. S. aureus and P. aeruginosa were analyzed using Scanning Electron Microscopy (SEM), where it was possible to observe a clear decrease in the number of cells without any apparent change in the morphology of the bacteria.