Detecção molecular de hemoplasma e tripanosomatídeos em gambás no município de Canoinhas, Santa Catarina, Brasil

Abstract

Resumo: Gambás são animais sinantrópicos e que participam do ciclo de transmissão de zoonoses. Anteriormente, duas espécies de micoplasmas hemotrópicos (hemoplasmas) foram detectados em gambás: 'Candidatus Mycoplasma haemodidelphidis' no gambá norte-americano (Didelphis virginiana) e um potencialmente novo Mycoplasma sp hemotrópico nos gambás-de-orelha-branca (Didelphis albiventris) do Brasil. A leishmaniose e a doença de Chagas são zoonoses negligenciadas na saúde pública. Nesse sentido, os objetivos deste estudo foram: i) determinar a prevalência de tripanosomatídeos e hemoplasmas em gambás de vida livre; ii) caracterizar molecularmente os tripanosomatídeos e hemoplasmas infectando gambás; iii) determinar os fatores associados à infecção de tripanosomatídeos e hemoplasmas em gambás do município de Canoinhas, Santa Catarina, sul do Brasil. Para tanto, 50 gambás-de-orelha-branca (33 capturas e 17 necropsias) foram avaliados por ensaios de reação em cadeia da polimerase (PCR) com base no gene hsp70 e região ITS1 de tripanosomatídeos e genes 16S rRNA e 23S rRNA de pan-hemoplasma. Seis de 50 (12%; 95% CI: 5.6%-23.8%) gambás apresentaram infestação por pulgas Ctenocephalides felis. Vinte de 50 (40%; IC 95%: 26,41-54,82%) gambás testaram positivo para Mycoplasma sp hemotrópico. O sequenciamento e a análise filogenética dos fragmentos dos genes 16S e 23S rRNA confirmaram que os animais foram infectados por um potencial novo Mycoplasma sp hemotrópico relatado anteriormente em gambás-de-orelha-branca nos estados do Paraná e Mato Grosso do Sul, do Brasil. O nome 'Candidatus Mycoplasma haemoalbiventris" foi proposto para este novo organismo. Não foram encontradas associações significativas entre sexo (p => 0,9999), área (p = 0,6199) ou material coletado (p = 0,8807) e positividade para tripanosomatídeos. Na análise pelo BLASTn, os fragmentos do gene hsp70 e região ITS1, as amostras apresentaram 92,96% - 98,52% de identidade com Trypanosoma cruzi e 94,03% de identidade com Leishmania infantum, resultados estes corroborados pela filogenia. A detecção de DNA de agentes etiológicos da Doença de Chagas e Leishmaniose Visceral em gambás, considerados reservatórios silvestres, no município de Canoinhas, Santa Catarina, Sul do Brasil, são de importância epidemiológica pela ausência de casos humanos na região. A pesquisa de patógenos transmitidos por vetores e com potencial zoonótico em animais silvestres é importante para caracterizar potenciais reservatórios na epidemiologia de enfermidades de importância em Saúde Pública.

Abstract: Opossums are synanthropic animals and can participate in the zoonosis transmission cycle. Previously, two species of hemotropic mycoplasmas (hemoplasmas) have been detected in opossums: 'Candidatus Mycoplasma haemodidelphidis' in the North American opossum (Didelphis virginiana) and a potentially novel hemotropic Mycoplasma sp. in white-eared possums (Didelphis albiventris) from Brazil. Leishmaniasis and Chagas disease are neglected zoonoses in public health. Accordingly, aims of this study were: i) to determine the occurrence of trypanosomatids and hemoplasmas in free-ranging opossums; ii) to molecularly characterize the trypanosomatids and hemoplasmas infecting opossums, iii) to determine factors associated with trypanosomatids and hemoplasmas infection in opossums from Canoinhas municipality, Santa Catarina State, southern Brazil. For this purpose, 50 white-eared opossums (33 captured and 17 road-killed animals) were evaluated by trypanosomatids polymerase chain reaction (PCR) assay based on hsp70 gene and ITS1 region and were evaluated by a pan-hemoplasma PCR assay based on 16S rRNA and 23S genes. Six out of 50 (12%; 95% CI: 5.6%-23.8%) opossums were infested by Ctenocephalides felis fleas. Twenty out of 50 (40%; 95% CI: 26.41-54.82%) opossums tested positive for hemotropic Mycoplasma sp. by PCR. Sequencing and phylogenetic analysis of the 16S and 23S rRNA gene fragments confirmed that animals were infected by a potentially novel hemotropic Mycoplasma sp. previously reported in white-eared opossums in the states of Paraná and Mato Grosso do Sul, in Brazil. The name 'Candidatus Mycoplasma Haemoalbiventris' proposed this novel organism. No significant association was found between gender (p = 0.7759), trap area (p = 0.0887) or presence of fleas (p = 0.3811) and positivity for hemoplasmas. A total of 05/50 (10%; 95% CI: 3.33-21.81%) opossums tested positive for trypanosomatids by the PCR assay targeting the ITS1 region and hsp70 gene. No significant associations were found between gender (p = >0.9999), trap area (p = 0.6199) or collected material (p = 0.8807) and positivity to trypanosomatids. In the analysis by BLASTn, the hsp70 gene fragments, the samples showed 92.96% - 98.52% identity with Trypanosoma cruzi and the ITS1 region 94.03% identity with Leishmania infantum, results corroborated by phylogeny. The detection of DNA of etiological agents of Chagas Disease and Visceral Leishmaniasis in opossums, considered wild reservoirs, in the municipality of Canoinhas, Santa Catarina, southern Brazil, is of epidemiological importance due to the absence of human cases in the region. The search for vector-borne pathogens with zoonotic potential in wild animals is important to characterize potential reservoirs in the epidemiology of diseases of public health importance.