Estudo do efeito antitumoral de fração de alcalóides totais isolada de Aspidosperma subincanum Mart. ex A. DC., Apocynaceae e desenvolvimento e validação de software de mensuração de área e contagem de número de colônias

Abstract

Resumo : Quimioterápicos disponíveis para o tratamento do câncer apresentam pouca eficácia e baixa especificidade. Alcaloides indolicos isolados de plantas tratam-se de importantes fontes de medicamentos antitumorais. Dessa forma, esse trabalho teve por finalidade avaliar o potencial antitumoral da fração de alcaloides totais (FAT) obtida de suplemento elaborado a partir da casca da A. subincanum, em modelo experimental in vitro, tentando-se identificar possíveis alcaloides presentes na fração. A análise de por CLAE e espectrometria de massas evidenciou a presença da uleina e outros 7 alcalóides não identificados em FAT. Em relação as atividades biológicas, FAT teve efeito citotóxico e antiproliferativo em diversas linhagens tumorais (Hela, U937, HRT-18 e MCF7), sendo mais eficaz em células MCF7. Tal atividade foi seletiva, quando comparado o efeito exercido por FAT em células MCF7 e sobre a linhagem McCoy (fibroblastos murinos). FAT promoveu o aumento do número de células na fase G1 do ciclo celular, levando ao desencadeamento de apoptose. A fração também causou redução intracelular de EROs devido a uma ativação forte e persistente da CAT. Por fim, o tratamento com FAT culminou na supressão dos níveis de COX-2. Conclui-se que FAT apresenta importante efeito antitumoral devido a interferências no equilíbrio redox e na expressão de COX-2. No que se refere à investigação do efeito antitumoral de compostos e produtos naturais, é comum a realização de ensaios que avaliam o efeito citotóxico e antiproliferativo dos mesmos em linhagens celulares tumorais, destacando-se, o ensaio clonogênico. Há diversos problemas envolvidos nas análises dos resultados obtidos por meio deste ensaio. Assim, o segundo objetivo desse trabalho foi desenvolver e validar um software para determinação da área (total e individual) e do número de colônias. O software apresentou performance superior quando comparado ao método manual (padrão ouro de análise) e plugin, uma vez que foi capaz de analisar uma maior quantidade de parâmetros, além de ter otimizado o tempo de análise. Conclui-se que o software em desenvolvimento trata-se de uma ferramenta eficaz para determinação da área e do número de colônias. Palavras-chave: Antitumoral. Citotoxicidade. Uleina. Aspidosperma subincanum.

Abstract : Chemotherapy drugs available for cancer treatment have low efficacy and low specificity. Indole alkaloids isolated from plants are important sources of antitumor drugs. Thus, the objective of this work was to evaluate the antitumor potential of the total alkaloid fraction (FAT) obtained from a supplement prepared from the A. subincanum bark, in an experimental model in vitro, in an attempt to identify possible alkaloids present in the fraction. Analysis by HPLC and mass spectrometry evidenced the presence of ulein and other 7 unidentified alkaloids in FAT. In relation to the biological activities, FAT had a cytotoxic and antiproliferative effect in several tumoral lines (Hela, U937, HRT-18 and MCF7), being more effective in MCF7 cells. Such activity was selective when compared to the effect exerted by FAT on MCF7 cells and on the McCoy line (murine fibroblasts). FAT promoted the increase in the number of cells in the G1 phase of the cell cycle, leading to the onset of apoptosis. The fraction also caused intracellular reduction of ROS because of a strong and persistent activation of CAT. Finally, treatment with FAT culminated in the suppression of COX-2 levels. It is concluded that FAT has an important antitumor effect due to interferences in redox balance and expression of COX-2. As regards the investigation of the antitumor effect of natural compounds and products, it is common to perform tests that evaluate the cytotoxic and antiproliferative effect of the same in tumor cell lines, especially the clonogenic test. There are several problems involved in the analysis of the results obtained by this assay. Thus, the second objective of this work was to develop and validate a software for determining the area (total and individual) and the number of colonies. The software presented superior performance when compared to the manual method (gold standard of analysis) and plugin, since it was able to analyze a greater amount of parameters, besides having optimized the analysis time. It is concluded that the software in development is an effective tool for determining the area and number of colonies. Key-words: Antitumor. Citotoxicity. Uleine. Aspidosperma subincanum.