Desenvolvimento de um modelo para avaliação da estabilidade de extratos vegetais, utilizando CLUE-Q-TOF e quimioterapia
Resumo
Resumo: A estabilidade química de fitoterápicos em geral é definida em função da quantificação de um marcador químico. Para o guaco tem-se considerado a cumarina como o marcador principal nos estudos de estabilidade. Porém, as drogas vegetais podem apresentar centenas de substâncias em diversas concentrações, e ainda essas substâncias podem ter algum efeito farmacológico, sinérgico ou não, quando administradas ao paciente. Por esse motivo, um modelo de estudo de estabilidade que considere não apenas o marcador, mas os metabolitos majoritários presentes na droga vegetal, é de grande importância para garantir qualidade, segurança e eficácia de medicamentos fitoterápicos. Para o estudo do fitocomplexo, além de ser necessário uma técnica analítica robusta e eficiente, são necessários métodos estatísticos que auxiliem na análise e interpretação dos dados, pois determinadas técnicas analíticas geram grandes quantidades de informação. A quimiometria é uma ferramenta estatística que tem sido utilizada para se analisar dados mais complexos e tem permitido separar amostras com características diferentes, podendo assim diferenciar amostras consideradas estáveis das não-estáveis (degradadas), sendo, portanto, uma ferramenta importante no controle de qualidade de drogas vegetais. O presente estudo teve como objetivo utilizar a análise de componentes principais (PCA) e o espectro de massas de extratos submetidos à diversas condições de estresses químico e físico e avaliar se é possível diferenciar amostras estáveis de não-estáveis e ainda buscar quais metabolitos sofreram alterações. Extratos hidroalcoólicos de folhas de Mikania glomerata foram preparados através de maceração com ajuda de sonicação (60 minutos) e submetido a diferentes condições de estresse: ácido (HCl 0,1 mol.L-1), básico (NaOH 0,1 mol.L-1), agente oxidante (H2O2 1,0%), luz (UV – Visível) por 15 dias e estresse térmico (60ºC) por 30 dias. As amostras obtidas em cada uma das diferentes condições foram diluídas e filtradas e posteriormente, analisadas por CLAE-DAD, com o objetivo de quantificar a cumarina e o ácido ocumárico, e CLUE-Q-ToF, para a obtenção dos espectros de massas. Os dados espectrais obtidos por CLUE-Q-ToF foram analisados por PCA. A PCA conseguiu separar os grupos de amostras, por diferentes componentes principais. Os gráficos de scores e loadings foram avaliados na procura de massas/cargas (m/z) responsáveis pela distinção das amostras consideradas estáveis e degradadas. O método quimiométrico mostrou-se adequado na avaliação da estabilidade de fitoterápicos, pois conseguiu separar as amostras em função das alterações sofridas quando submetidas a diferentes condições de estresse e em diferentes tempos. Neste trabalho sugere-se que em um estudo de estabilidade de fitoterápicos deve-se avaliar o fitocomplexo e não apenas um único composto considerado como marcador Abstract: The chemical stability of phytotherapics is generally defined as a function of the quantification of a chemical marker. For guaco, coumarin has been considered its main marker in stability studies. However, plant drugs may contain hundreds of substances in varying concentrations, and even these substances may have some pharmacological effect, synergistic or not, when given to the patient. For this reason, a model of stability study that considers not only the marker, but the major metabolites present in the plant drug is of great importance to guarantee quality, safety and efficacy of herbal medicines. For the study of the phytocomplex, besides being necessary a robust and efficient analytical technique, statistical methods are necessary that aid in the analysis and interpretation of the data, since certain analytical techniques generate large amounts of information. Chemometrics is a statistical tool that has been used to analyze more complex data and has allowed to separate samples with different characteristics, thus being able to differentiate samples considered stable from nonstable (degraded), and, therefore, an important tool in the control of quality of plant drugs. The objective of the present study was to use the principal component analysis (PCA) and the mass spectra of extracts subjected to various chemical and physical stress conditions and to evaluate if it is possible to differentiate stable samples from non-stable ones and also to look for which metabolites have undergone alterations. Hydroalcoholic extracts of Mikania glomerata leaves were prepared using maceration technique under sonication (60 minutes) and subjected to different stress conditions: acid (0.1 mol.L-1 HCl), basic (0.1 mol.L-1 NaOH), oxidizing agent (H2O2 1.0%), light (UV - Visible) for 15 days and thermal stress (60ºC) for 30 days. The samples obtained in each of the different conditions were diluted and filtered and later analyzed by HPLC-DAD, aiming the quantification of coumarin and o-coumaric acid, and UPLC-QToF to acquire the mass spectra. The spectral data obtained by UPLC-Q-ToF were analyzed by PCA. The PCA was able to separate the groups of samples, by different principal components. The scores and loadings charts were evaluated, searching for m/z responsible for the distinction between samples considered stable and degraded. The chemometric method proved to be adequate in the evaluation of the stability of phytotherapics, because it was able to separate the samples in function of the alterations undergone when under different stress conditions and at different times. This study suggests that in a study of phytotherapeutic stability, the phytocomplex should be evaluated and not only a single compound considered as a marker
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