Purificação e caracterização da galactose oxidase intracelular de Dactylium dendroides

Abstract

Resumo: A galactose oxidase intracelular de D. dendroides foi purificada à homogeneidade com um rendimento de 64%. A enzima homogênea é uma proteína monomérica com 72.000 de peso molecular, pH ótimo entre 6,6 - 7,0 e temperatura ótima de 30°C. A galactose oxidase intracelular apresenta ampla especificidade e os valores de Km app determinados para os diferentes substratos foram: D-galactose 40 mM; dihidroxiacetona 35 mM; 2-desoxi-D-galactose 83 mM; D-galactosamina 20 mM; metil - a - D-galactopiranosídeo 37,5 mM; o-nitrofenil-B-D-galactopiranosídeo 50 mM; B-lactose 333 mM; melibiose 22 mM; rafinose 60 mM; estaquiose 14 mM e guaran 3,3 mM. A enzima apresenta uma cinética não Michaeliana para a maioria de seus substratos, sendo que os respectivos coeficientes de HILL foram determinados. A galactose oxidase intracelular apresenta cooperatividade cinética positiva para o oxigênio, com um S 0,5 de 290 yM e coeficiente de HILL (nh) de 1,66. A enzima é inibida pela H2O2; cianeto; iodoacetamida e quelantes de metais como o dietilditiocarbamato, hidroxilamina e azida sódica.