Determinação da estrutura química do polissacarídeo presente na goma de Vochysia sp. (Quaruba)

Abstract

Resumo: A goma de exsudato de Vochysia sp., Vochysiaceae, foi coletado na Floresta Amazônica, município de Caquetá - AC. Esta goma foi solubilizada em água formando uma solução de baixa viscosidade. O polissacarídeo obtido foi analisado por HPSEC-MALLS e mostrou-se como uma molécula heterogênea. Tentativas de purificação por congelamento e degelo e precipitação por Cetavlon mostraram-se ineficazes, sugerindo a presença de um agregado molecular, o qual não foi desfeito pelo tratamento com uréia. A hidrólise ácida forneceu a seguinte composição monossacarídica Man:GlcA:Ara:Gal:Glc na razão molar de 30:30:16:10:14. A presença do ácido glucurônico foi determinada através de carboxirredução. As análises de metilação nos dois polissacarídeos, original e carboxirreduzido, revelaram unidades de manose substituídas em 0-2 e unidades de glucose, demonstradas no polissacarídeo carboxirreduzido, substituídas em 0-4. Estes dois derivados estão em maior porcentagem e pode-se inferir a presença de uma cadeia principal formada por unidades de manose e ácido glucurônico. Os espectros de 13CRMN revelaram um espectro muito simples com apenas dois sinais na região de carbono anomérico, sugerindo uma estrutura de grupos dissacarídicos regularmente distribuídos. Os sinais em d 99,3 e d 101,5 podem ser atribuídos ao C-1 das unidades de manose e ácido glucurônico. O sinal em d 174,8 corresponde ao C-6 das unidades de ácido glucurônico. O espectro do polissacarídeo carboxirreduzido foi praticamente idêntico e onde foi observado o desaparecimento do pico de C-6 de ácido glucurônico, demonstrando que a carboxirredução foi eficiente. Resultado também confirmado pela dosagem zero de ácidos urônicos. O polissacarídeo original foi submetido a uma hidrólise ácida parcial para a produção de oligossacarídeos contendo ácido urônico. Estes foram separados e isolados por cromatografia preparativa em papel, dando um rendimento de 14% e 10,3% para o Oligo-1 e Oligo2, respectivamente. Por análises de metilação foi encontrado para o Oligo-1, a presença do derivado 2,3,6-Me3-Man. Entretanto este oligossacarídeo foi analisado por 13C- e 1H-RMN, HMQC e COSY, sendo definido que trata-se de um dissacarídeo com a unidade de manose redutora, substituída em C-2 por uma unidade de ácido glucurônico no terminal não redutor na estrutura B-D-GlcpA-(1->2)-aB-D-Manp. O Oligo-2 apresentou por análises de metilação o derivado 2,3,6-Me3-Man. Foram realizadas análises de 13C- e 1H-RMN, HMQC, COSY, TOCSY e ROESY, demonstrando que se trata de um tetrassacarídeo com dois grupos dissacarídicos idênticos ao anterior, B-D-GlcpA-(1->2)-a-D-Manp-(1->4)-(B-D-GlcpA-(1->2)-aB-DManp, o que sugere esta unidade repetitiva para a cadeia principal. A estrutura deste oligossacarídeo foi confirmada por análise de electron-spray, que definiu não só a presença de quatro unidades monossacarídicas, como a sequência destas unidades.