Análise quantitativa e sazonal de alcaloides por LC-MS/MS e determinação da atividade antiproliferativa em linhagem de carcinoma cervical do extrato hidroalcoólico de folhas de Annona rugulosa (SCHLTDL.) H. Rainer

Abstract

Resumo: O gênero Annona Linn (Annonaceae) apresenta cerca de 200 espécies encontradas no Brasil. Dentre elas a espécie Annona rugulosa (Schltdl.) H. Rainer, conhecida como araticum, e utilizada na medicina popular para o tratamento de dores renais e infecções de garganta. Estudos realizados com esta espécie, identificaram treze alcaloides, sendo oito aporfínicos, dois oxoaporfínicos e três benzilisoquinolínicos. Os alcaloides destas classes apresentam diversos efeitos biológicos tais como, atividade antimicrobiana, antioxidante, citotóxica e antiproliferativa. Devido à escassez de estudos químicos e biológicos referentes a esta espécie, objetivou-se desenvolver um método de quantificação para análise sazonal de alcaloides nas folhas de A. rugulosa por cromatografia à líquido de ultra eficiência acoplada a espectrometria de massas sequencial (UPLC-MS/MS), além de avaliar a atividade antiproliferativa do extrato bruto das folhas em células de câncer cervical (Hela). Para isso, foram coletadas amostras de folhas de 5 exemplares desta espécie, localizadas no Capão do Cifloma - UFPR, durante um período de 12 meses. O método de análise sazonal dos alcaloides presentes nas folhas se mostrou eficaz apresentando ótima precisão e exatidão. Não houve diferença significativa das concentrações dos alcaloides nas folhas durante o período de tempo avaliado. A utilização do alcaloide da classe das metil-xantinas como padrão interno (cafeína) foi eficaz para as análises de quantificação dos alcaloides das classes dos aporfinos, oxoaporfinos e benzilisoquinolinos encontrados na espécie, podendo assim substituir os padrões analíticos destes alcaloides nestas análises. Ainda, o extrato bruto apresentou significativo efeito antiproliferativo sendo capaz de potencializar a atividade citotóxica da vincristina, indicando que o mesmo trata-se de um potencial coadjuvante a ser utilizado no tratamento de câncer cervical. Palavras-chave: Alcaloides. Análise Quantitativa. LC-MS/MS. A. rugulosa. Atividade Antiproliferativa.

Abstract: Around 200 species of the genus Annona Linn (Annonaceae) are found in Brasil. Among these, the species Annona rugulosa (Schltdl.) H. Rainer, known as araticum, is commonly used in folk medicine to treat kidney pain and throat infections. Studies in this species have identified thirteen alkaloids, eight of which are aprophine, two oxoaporphine and three benzylisoquinoline alkaloids. The alkaloids of these classes present several biological effects such as antimicrobial, antioxidant, cytotoxic and antiproliferative activity. Due to the lack of chemical and biological studies on this species, the objective was to develop a quantification method for seasonal analysis of alkaloids in A. rugulosa leaves with the Ultra High Performance Liquid Chromatography - tandem mass Spectrometer (UPLC-MS/MS) in addition the antiproliferative activity of the raw extract was tested on cervical câncer cells (Hela). In order to do this, during twelve months leaves were collected from five individuals of this species, located at the Capão do Cifloma- UFPR. The method of season analysis of the the alkaloids was efficient, and presented high precision and accuracy. The alkaloids' concentration did not present a significant difference during the study. The use of the methyl-xanthine class alkaloid as an internal standard (caffeine) also proved itself sufficient in the quantitative analysis of the aprophine, oxoaporphine and benzylisoquinoline alkaloids found in the species and could thus replace the analytical standards of the alkaloids in these analyzes. In addition, the use of the raw extract has significant antiproliferative consequences and is capable of potentializing the cytotoxic activity of the alkaloid vincristine. Therefore, this raw extract can be used to potentialize the treatment of cervical câncer. Key words: Alkaloids. Quantitative Analysis. LC-MS/MS. A. rugulosa. Antiproliferative activity.