Caracterização estrutural e avaliação da atividade antinociceptiva de B-D-glucanas(1-3),(1-6) isoldadas dos ascomicetos comestíveis : Cookeina tricholoma e Cookeina speciosa

Abstract

Resumo: Os ascomicetos comestíveis Cookeina speciosa (Cs) e Cookeina tricholoma (Ct), encontrados em regiões tropicais e subtropicais de países como Brasil, Panamá e Costa Rica foram submetidos à sucessivas extrações exaustivas: aquosa a frio (CW) e a quente (HW), e alcalina (KOH 2%; K2). As frações polissacarídicas brutas obtidas a partir dos diferentes extratos foram fracionadas por congelamento e degelo, e as frações insolúveis (I) resultantes mostraram-se compostas por ?-D-glucanas (1?3), (1?6) -ligadas. Foram purificadas seis ?-D-glucanas, com características estruturais diferentes, as quais foram determinadas através de análises de metilação, RMN-13C, degradação controla de Smith e por análises de SEC. Todas as ?-D-glucanas apresentaram cadeia principal, formada por unidades de ?-D-Glcp (1?3) -ligadas, mas com diferentes graus de ramificações. As cadeias laterais mostraram-se compostas, tanto apenas por cadeias laterais de ?-D-Glcp (1?6) -ligadas de diferentes extensões (ICW-Ct e ICW-Cs, IHW-Ct), quanto por uma mistura de cadeias laterais de ?-D-Glcp (1?6) -ligadas e unidades terminais não redutoras ?-D-Glcp (IHW-Cs, IK2-Ct e IK2-Cs), substituindo a cadeia principal em O-6. Além de apresentar diferentes graus de ramificação, as ?-D-glucanas também apresentaram diferentes pesos moleculares (MW 3,7 - 8,2 x 105 Da). Devido as diferenças estruturais observadas, diferentes graus e padrões de ramificação e MW, nas diferentes ?-D-glucanas purificadas, estas apresentaram-se como boas candidatas para avaliação da relação entre estrutura e atividade. O modelo de nocicepção induzida por injeção de formalina foi escolhido para avaliação das propriedades antinocipetivas das ?-D-glucanas de C. tricholoma e C. speciosa. O tamanho das cadeias laterais e o peso molecular mostraram-se importantes na avaliação da atividade biológica, uma vez que a molécula IK2-Ct não mostrou atividade no modelo de antinocicepção utilizado. Já a fração IK2-Cs, apresentando menor quantidade relação de cadeias laterais de ?-D-Glcp (1?6) -ligadas, foi a fração que desempenhou atividade biológica mais significativa, com DI50 0,55 (0,32-0,93) mg kg-1. Palavras-chave: Ascomicetos, Cookeina tricholoma, Cookeina speciosa, ?-D-glucanas- (1?3), (1?6), atividade antinociceptiva.

Abstract: The edible ascomycetes Cookeina speciosa (Cs) and Cookeina tricholoma (Ct), found in tropical and subtropical regions of countries like Brazil, Panama and Costa Rica underwent successive exhaustive extractions: cold (CW) and hot water (HW) and alkaline (KOH 2%; K2). The crude polysaccharide fractions obtained from the different extracts were fractionated by freeze-thawing, and the resulting insoluble fractions (I) showed to be composed of (1¨3), (1¨6)-linked ƒÀ-D-glucans. Six ƒÀ-D-glucans were purified presenting different structural characteristics, which were determined by methylation analysis, 13C-NMR, controlled Smith degradation and SEC analysis. All ƒÀ-D-glucans showed a main chain formed by (1¨3)-linked ƒÀ-D-Glcp units, but with different degrees of branching. The side chains were shown to be composed, either only (1¨6)-linked ƒÀ-D-Glcp side chains of different extensions (ICW- Ct, ICW-Cs and IHW-Ct), or a mixture of (1¨6)-linked ƒÀ-D-Glcp side chains and single ƒÀ-D-Glcp as non-reducing units (IHW-Cs, IK2-Cs and IK2-Cs) substituting the main chain at O-6. In addition to presenting different degrees of branching, the ƒÀ-D-glucans also showed different molecular weights (MW from 3.7 to 8.2 x 105 Da). Due to the structural differences, difference in pattern and branching degree, and MW presented by the purified ƒÀ-D-glucans, they presented themselves as good candidates regarding the evaluation of structure-activity relationship. The model of nociception induced by formalin injection was chosen for evaluation of the antinocipetive properties of the ƒÀ-D-glucans from C. tricholoma and C. speciosa. The length of the side chains and the molecular weight proved to be important when assessing the biological activity, since IK2-Ct showed no antinociceptive activity in the model used. On the other hand IK2-Cs exhibited a low ratio of (1¨6)-linked ƒÀ-D-Glcp side chains and was the fraction which displayed the most significant biological activity with ID50 0.55 (0.32 to 0. 93) mg kg-1. Keywords: Ascomycetes, Cookeina tricholoma, Cookeina speciosa, (1¨3), (1¨6) ƒÀ-D-glucan, antinociceptive activity.