Preparação de ferramentas de genética reversa para o estudo funcional da proteína de união ao RNA TcDRBD8 de Trypanosoma cruzi

Abstract

Resumo : A doença de Chagas tem como agente etiológico o protozoário Trypanosoma cruzi e é considerada um dos principais problemas de saúde pública na América Latina. O Trypanosoma cruzi apresenta quatro estágios já bem caracterizados durante o ciclo de vida, alternando-se entre um hospedeiro invertebrado, o barbeiro, e o hospedeiro vertebrado, um mamífero. Como os tripanosomatídeos não possuem promotores típicos para a regulação individual dos genes, acredita-se que a regulação de sua expressão gênica ocorra majoritariamente por mecanismos pós-transcricionais, permitindo uma rápida adaptação dos parasitas a diferentes condições. Os mecanismos póstranscricionais de regulação da expressão gênica são mediados por proteínas de ligação ao RNA, as RBPs (RNA Binding Proteins). Algumas RBPs foram caracterizadas em T. cruzi e demonstraram a mobilização diferencial de RNAs e participação na regulação pós-transcricional destes organismos. Em eucariotos superiores, o domínio mais abundante em proteínas de ligação ao RNA é o domínio RRM (RNA Recognition Motif), sendo que as proteínas que apresentam este domínio estão relacionadas com grande parte dos processos pós-transcricionais responsáveis pela regulação da expressão gênica, como a exportação de RNAs, processamento de mRNA, estabilidade dos transcritos e mobilização para a tradução. Nosso grupo identificou previamente 81 proteínas contendo o domínio RRM em T. cruzi. Dentre elas encontra-se a TcDRBD8, que possui dois domínios RRM, é anotada como hipotética e é exclusiva de T. cruzi. Ainda, análises de perfil ribossomal sugerem fortemente que a TcDRBD8 seja expressa em maior quantidade na forma metacíclica de T. cruzi quando comparada à forma epimastigota, o que reforça o interesse em estudar o papel desta proteína. Assim, propomos neste projeto, construir ferramentas de genética reversa que permitam a posterior caracterização funcional da proteína TcDRBD8, que é uma RBP com dois domínios RRM, diferencialmente expressa no ciclo de vida do parasita e exclusiva de T. cruzi. A caracterização de proteínas que possam estar envolvidas na regulação da expressão gênica de T. cruzi podem auxiliar na compreensão dos mecanismos moleculares de diferenciação e infecção do parasita bem como desta importante patologia. construir ferramentas de genética reversa que permitam a posterior caracterização funcional da proteína TcDRBD8, que é uma RBP com dois domínios RRM, diferencialmente expressa no ciclo de vida do parasita e exclusiva de T. cruzi. A caracterização de proteínas que possam estar envolvidas na regulação da expressão gênica de T. cruzi podem auxiliar na compreensão dos mecanismos moleculares de diferenciação e infecção do parasita bem como desta importante patologia.