Construção de um plasmídeo para a expressão da proteína mutante pontual Glnk P10L de Herbaspirillum seropediace

Abstract

Resumo : Herbaspirillum seropedicae é uma ß-proteobacteria, promotora de crescimento vegetal, encontrada em gramíneas como arroz, milho e sorgo além de outras plantas de interesse econômico. Estudos apontam ganhos de até 50% do peso seco em plantas inoculadas com a espécie. H. seropedicae é capaz de colonizar e fixar nitrogênio dentro de tecidos das plantas. O processo de fixação biológica de nitrogênio é catalisado pelo complexo enzimático nitrogenase e demanda um alto custo energético. A expressão e a atividade do complexo enzimático nitrogenase são regulados, sendo reprimidos na presença de oxigênio e amônio. No centro da regulação transcricional dos genes nif (genes relacionados com a fixação biológica de nitrogênio), está a proteína NifA, a ativadora de transcrição desses genes. A proteína NifA de H. seropedicae é regulada em resposta aos níveis de oxigênio e amônio. O domínio Aminoterminal (GAF) desta proteína regula a sua atividade em resposta aos níveis de amônio, num processo que envolve a proteína GlnK. Em uma biblioteca de mutantes pontuais para glnK, foi obtido um mutante, o GlnK/P10L que não é capaz de ativar NifA em condições de fixação de nitrogênio. O objetivo desse projeto foi subclonar o gene glnK mutante presente no MCSII do vetor pETDUET1 no vetor de expressão pET29a para que essa proteína fosse expressa à partir do promotor T7. A proteína GlnK/P10L foi expressa e purificada a próxima etapa desse projeto será a sua purificação.