Análise de expressão do gene cd44 induzido pelo fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) em linhagens tumorais de mama

Abstract

Resumo : O câncer de mama é o segundo tipo de câncer mais frequente no mundo. A metástase é a principal causa de morte entre os pacientes diagnosticados com essa neoplasia. O microambiente tumoral é composto por células tumorais heterogêneas e por células estromais localizadas na matriz extracelular, nutridas por um sistema vascular. O fator de crescimento vascular endotelial (VEGF) é um dos mediadores relacionados com a angiogênese, que é o processo de formação de vasos sanguíneos importantes para a transição epitelial-mesenquimal (TEM). Alterações entre as células e entre as interações celulares com os elementos de matriz estão relacionadas com a invasão tumoral. O receptor glicoproteico CD44 é o principal receptor do ácido hialurônico, do colágeno e fibronectina, presentes na matriz. A presença de CD44 na superfície das células caracteriza as células iniciadoras tumorais (Cancer stem cells). O objetivo desse trabalho foi avaliar a interferência do VEGF na expressão do gene CD44 e de sua proteína na superfície celular das linhagens tumorais de mama BT-474, MCF-7, SKBR-3 e ZR-75-1. As células foram tratadas com 10 ng e 50 ng de VEGF por um período de 24 horas em meio de cultura livre de soro. O anticorpo anti-CD44 marcado com PE e seu isotipo foram utilizados nos ensaios de citometria de fluxo. Na linhagem tumoral MCF-7 foi observado um aumento significativo em relação ao controle sem VEGF (p =10-6 ) na marcação da superfície celular pela molécula CD44 após o tratamento com 10 ng de VEGF. A proporção de células CD44 positivas nessa linhagem, quando submetidas ao tratamento com 50 ng de VEGF (15,97%), foi inferior àquela observada no tratamento com 10 ng (55,33%) (p=10-6 ). As linhagens tumorais, BT-474 e SKBR-3 consideradas pela literatura negativas para CD44, não sofreram interferência na marcação de CD44 após o tratamento com VEGF. Por outro lado, a linhagem ZR-75- 1 apresentou marcação positiva para CD44, independente do efeito do VEGF, porém sem significância estatística. A análise da expressão gênica de CD44 nos experimentos foi realizada por RT-qPCR, empregando-se como referência o gene HPRT1. Os resultados de expressão do gene CD44 nas linhagens tumorais frente aos tratamentos com VEGF não apresentaram diferenças significativas, sendo apresentada uma correlação (p<0,05) entre estes dados e os resultados de marcação da citometria de fluxo. Pode-se concluir que VEGF interfere na expressão do receptor CD44 na superfície das células da linhagem tumoral MCF-7. Na demais linhagens não houve alteração significativa na expressão de CD44, quando estas foram tratadas com VEGF.