Obtenção de genes mutagenizados da estirpe SmRI de Herbaspirillum seropedicae regulados pelo flavonóide naringenina

Abstract

Resumo : Herbaspirillum seropedicae é uma bactéria díazotrófica endofítica, membro da subclasse p das Proteobactérias (Baldani et aL, 1986). Essa bactéria foi encontrada associada ao milho (Zea tnays), arroz (Oryza. sativa), sorgo (Sorghum bicolor), cana de açúcar (Saccharum officiarum), e também à algumas espécies tropicais como a bananeira {Musa spp) e o abacaxizeiro (Arianas comosus). Estudos da interação de H. seropedicae com plantas mostraram o seu potencial como biofertilizante nitrogenado, e sua capacidade de estimular o desenvolvimento das plantas pela produção de fitohormônios. Mutantes aleatórios foram construídos pela inserção cromossomal aleatória de um plasmídeo (pTnMod-OGmKmlacZ) contendo um gene marcador lacZ e um gene que confere resistência à canamicina na estirpe selvagem SMRI. Foram obtidos três mil mutantes aleatórios de Herbaspirillum seropedicae estirpes SMRL O gene lacZ não possui promotor, assim a expressão da P-galactosidase depende da presença do promotor a montante do ponto de inserção, o que permite a análise da expressão do gene mutagenizado em diferentes condições de crescimento. Os mutantes obtidos foram analisados quanto a expressão diferencial na presença do flavonóíde naringenína. Os flavonóides são compostos liberados pelas plantas que agem como substâncias quimiotáticas e têm papel fundamental no processo de nodulação por bactérias do gênero Rhizobium. A expressão gênica diferencial foi analisada nestes mutantes através de ensaios de P-galactosidase e a identificação do gene mutado será feita por sequenciamento e comparação com o banco de dados do Programa Genoma do Paraná (GENOPAR).