Caracterização de duas proteínas de ligação ao RNA com domínio RRM em Trypanosoma cruzi identificadas a partir de poteômica de mRNPs

Abstract

Resumo : Trypanosoma cruzi é um protozoário da ordem kinetoplastidae e família tripanosomatidae causador da doença de Chagas que afeta milhões de pessoas no mundo. O ciclo de vida do T. cruzi envolve dois hospedeiros (inseto triatomíneo e mamífero) e três estágios de desenvolvimento bem definidos: epimastigotas, tripomastigotas e amastigotas. A regulação da expressão gênica em tripanossomatídeos difere daquela de outros eucariotos, por não possuir controle transcricional para a maioria dos seus genes. Apesar de demonstrado a mobilização diferencial em T. cruzi e a importância da regulação pós-transcricional, poucas proteínas de ligação ao RNA foram caracterizadas até o momento: poli(A) binding protein, spliced leader RNA-binding protein, proteínas Pumilio, RNA binding proteins com motivos CCCH, UBP1 e UBP2. O domínio RRM (RNA Recognition Motif) de ligação ao RNA é um dos mais abundantes domínios encontrados em proteínas de ligação a RNA em eucariotos superiores. Proteínas que contém esse domínio RRM estão envolvidas na maioria dos processos pós-transcricionais de regulação da expressão gênica como, por exemplo, processamento de mRNA e rRNA, exportação de RNAs e estabilidade destes transcritos. Este domínio possui cerca de 90 aminoácidos e pode se ligar com fraca ou forte afinidade e especificidade a RNAs e interagem com transcritos de diferentes comprimentos. Esse domínio também pode interagir com outros RRM o que pode explicar o motivo pelos quais proteínas-RRM são tão numerosas e tem um papel importante no metabolismo de RNA da célula. Esse domínio de vital importância em eucariotos superiores está também presente em T. cruzi sendo que algumas proteínas já foram caracterizadas como a TcUBP1. Esta proteína de ligação a RNA contém um único motivo RRM. Atua como um fator trans na desestabilização de mRNAs por se ligar a elementos ricos em AU das regiões 3’ não traduzidas do mRNA da SMUG mucina. O papel vital de proteínas RRM em outros eucariotos sugere que essas possam ser importantes na regulação da expressão gênica em T. cruzi. Durante a identificação de proteínas associadas a mRNAs formando complexos ribonucleoproteicos (mRNPs), várias foram identificadas e selecionadas para caracterização mais específica. Tendo em vista que poucas proteínas de ligação a RNA foram caracterizadas neste parasita até o momento e da importância dos mRNPs na regulação da expressão gênica, este trabalho trata da caracterização funcional de duas proteínas de ligação a mRNAs que apresentam domínios RRM, previamente identificadas em uma análise de proteínas de interação a RNA utilizando uma abordagem proteômica em larga escala, e na elucidação de seu papel na regulação da expressão gênica em T. cruzi.