Identificação e caracterização do gene rpoC de Herbaspirillum seropedicae

Abstract

Resumo : A regulação da expressão gênica ocorre principalmente a nível transcricional. O principal alvo deste controle, em bactérias, é a RNA polimerase DNAdependente em resposta a fatores intrínsecos e extrínsecos. A regulação da transcrição está mais bem caracterizada em E. coli. A RNA polimerase de E. co/i é uma enzima oligomérica que possuí duas subunidades a, uma ~, uma W e uma 0). A subunidade W é responsável pela ligação ao DNA molde e pela interação com os fatores cr. A região C-terminal da subunidade W não está envolvida com a atividade catalítica ou com a montagem da holoenzima. Poucos estudos sobre a RNA polimerase de outros organismos foram feitos. Neste trabalho, o gene rpoC de Herbaspirillum seropedícae, que codifica para a subunidade W da RNA polimerase, foi identificada no Banco de Dados do Programa GENOPAR. Este gene foi amplificado por PCR usando oligonucleotídeos iniciadores complementares a seqüência das regiões que codificam para a extremidade N-terminal e C-terminal da subunídade W da RNA polimerase de H. seropedicae. As condições ótimas de amplificação foram determinadas. O fragmento obtido possui 4242pb e está sendo clonado no vetor pET29a. O clone resultante deverá expressar a subunidade W ligada a uma cauda de histidina.