Clonagem e sequenciamento parcial do gene amtB de Azospirillum brasilense FP2

Abstract

Resumo : Azospirillum brasilense é uma bactéria capaz de fixar nitrogênio (diazotrófica) que se associa com diversas gramíneas de interesse agrícola como milho, trigo e arroz. O transporte de amônia é de fundamental interesse em bactérias diazatrófi.cas devido a ação repressora deste íon sobre a fixação de nitrogênio. A nossa estratégia inicial para a clonagem do gene que codifica para o transportador de amônio (amtB) envolveu a amplificação de um pequeno fragmento deste gene por PCR, utilizando oligonudeotídeos sintetizados quimicamente. Para determinar a sequência dos oligonucleotídeos a serem utilizados nas amplificações foram comparadas sequências de aminoácidos, já, conhecidas, de transportadores de amônia de três organismos: Escherichia co/i, Mycobacterium tubercuJosis e Bacillus subtilis. As regiões que apresentavam alta homologia foram convertidas para sequência de nucleotídeos utilizando uma tabela de preferência de códons para A. brasilense. O fragmento de DNA ampHficado por PCR foi clonado e sequenciado (número de acesso no GenBank: AF082303). A sequência foi submetida a comparação com banca de dados e apresentou alta homologia com transportadores de íons amônia de diversos organismos. Este fragmento donado será utilizado como sonda em . hibridizações contra uma biblioteca genômica de, A. brasilense que estamos construindo para que consigamos clonar o gene completo.