Identificação de proteínas envolvidas no mecanismo de ação do peróxido de ortovanadato de sódio em músculo sóleo de rato

Abstract

Resumo : A diabetes é uma doença que acomete milhões de pessoas em todo o mundo, ano após ano. Associado à ela, alterações importantes ocorrem no metabolismo intermediário, levando a várias complicações, como doenças dos olhos, dos rins, lesão dos nervos e problemas nos vasos sanguíneos. O tipo mais comum de diabetes é o denominado insulino-independente (tipo 11), caracterizado principalmente pela resistência periférica à insulina. Esta resistência também é comum em diversas patologias, como câncer, traumas em geral e jejum. Portanto, o estudo de substâncias com atividades insulin-like é de interesse particular para a reversão ou amenização deste quadro. Este trabalho teve como objetivo investigar o papel do IRS-1 e do GLUT -4 no mecanismo de ação do ortovanadatado de sódio peroxidado, um composto insulin-like, em músculo sóleo in vitro. Ratos machos Wistar pesando 180 g foram obtidos do Biotério do Setor de Ciências Biológicas da UFPR e sacrificados por deslocamento cervical, seus músculos sóleos retirados e pré-incubados por 30' em tampão Krebs-Ringer contendo 5.6 mM de glicose e BSA a 1.0%. Em seguida, os músculos foram transferidos para outros frascos contendo o mesmo tampão, na ausência ou presença de insulina - I (1 mU/ml) ou peróxido de Ortovanadato de Sódio - POV (1 mM) e incubados por mais 15", 30",60" ou 90". Ao término do tempo de incubação, o músculo foi congelado em nitrogênio líquido e homogeneizado em tampão de lise (Tris-HCI 50 mM, pH 7.5; NaCI 150 mM; Tween 20 1 %;ortovanadato de sódio 1 mM e aprotinina 10 Ilg/ml). O lisado muscular foi submetido a SDS-PAGE (géis de 7,5; 10 e 12%) e, em seguida, as proteínas do gel - foram transferidas para membrana de nitrocelulose e submetidas à técnica de "Western Blotting" para a identificação de duas proteínas específicas: o IRS-1 e o GLUT -4. Não foi possível detectar expressão do IRS-1, talvez devido ao uso do anticorpo escolhido. Já para o GLUT -4, houve aumento na sua expressão tanto nos músculos incubados com POV como nos incubados com insulina no tempo de 15". Interassantemente, com POV esta expressão perdurou até 60" e nos músculos incubados com insulina a expressão do GLUT-4 voltou aos níveis do controle. O aumento prolongado de GLUT -4 nos músculos incubados com peróxido de ortovanadato de sódio pode ter como possível explicação a ação do vanádio como potente inibidor de fosfatase de fosfotirosinas protéicas prevenindo, assim, a desfosforilação de intermediários com fosfotirosinas o que iria resultar na maior permanência (expressão) do GLUT -4 na membrana plasmática. Assim, demonstramos que a proteína GLUT -4 está envolvida no mecanismo de ação do peróxido de ortavanadato de sódio em músculo sóleo e este é um dos mecanismos pelo qual o vanádio exerce seus efeitos insulin-like, porém acreditamos que sua via de sinalização seja diferente do da insulina.