Clonagem e caracterizaçao do gene que codifica a proteína TcZFP4 contendo domínio CCCH de interaçao com zinco, no protozoário Trypanosoma cruzi (Chagas, 1909)

Abstract

Resumo : A tripanosomíase americana ou doença de Chagas afeta cerca 18 milhões de pessoas, em cerca de 20 países. Essa enfermidade é causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi, um organismo que ocupa a região basal na escala evolutiva dos eucariotos. Esse protozoário é de grande interesse biológico, pois além de ser a uma causa de morbidade, ele possui capacidade de diferenciação reversível. A regulação da expressão gênica ocorre pós-transcricionalmente e fatores relacionados a essa regulação ainda são pouco conhecidos. Nesse trabalho buscou-se caracterizar uma proteína com motivo CCCH de interação com o íon zinco, chamada TcZFP4, que por possuir esse motivo, pode estar relacionada na ligação com RNAs, podendo assim participar no controle da expressão gênica. Através de técnicas de Biologia Molecular foi possível identificar que a região codificante do gene TcZFP4 contém 654 nucleotídeos, codificando uma proteína de 24 kDa. Observou-se que essa proteína além de conter o motivo CCCH, também possui um domínio rico em resíduos dos aminoácidos Lisina/Glutamina, que pode estar relacionado à ligação da mesma a outras proteínas para a formação de dímeros funcionais. A purificação da proteína foi possível apenas em sua forma desnaturada. Não foi possível sua expressão na forma solúvel quando clonada no plasmídeo de expressão pQE30. Outras técnicas deverão ainda ser utilizadas para tentar se obter a proteína solúvel e anticorpos policlonais contra essa proteína. Sendo a TcZFP4 específica de Tcruzi o conhecimento da sua função é de grande relevância para a obtenção de um alvo para o combate da enfermidade causada por esse protozoário, além de um melhor conhecimento sobre fatores de diferenciação em tripanossomatídeos.