Identificaçao de proteínas envolvidas no mecanismo de açao do ortovanadato de sódio peroxidado em músculo sóleo de rato isolado incubado (in vitro)

Abstract

Resumo : A diabetes é uma doença que acomete milhões de pessoas em todo o mundo. Associado à ela, alterações importantes ocorrem no metabolismo de carboidratos, gorduras e proteínas, levando a várias complicações crônicas a nível microvascular (retinopatias, nefropatias) e macrovascular (doenças coronárias, doenças vasculares periféricas). O tipo mais comum de diabetes é o denominado insulino-independente (tipo II), caracterizado principalmente pela resistência periférica à insulina. Deste modo, o estudo de substâncias com atividades insulino-miméticas é de interesse particular para a reversão ou amenização deste quadro. Este trabalho teve como objetivo investigar os papéis do IRS-1, IRS-2, PI-3K e GLUT-4 no mecanismo de ação do ortovanadatado de sódio peroxidado, um composto insulin-like, em músculo sóleo in vitro. Ratos machos Wistar pesando entre 150 - 180 g foram sacrificados por deslocamento cervical, seus músculos sóleos retirados e pré-incubados por 30' em tampão Krebs-Ringer. Em seguida, os músculos foram transferidos para frascos contendo o mesmo tampão, na ausência ou presença de insulina - I (1 mU/ml) ou peróxido de Ortovanadato de Sódio - POV (1 mM) e incubados por mais 15, 30, 60 ou 90 segundos. Ao término do tempo de incubação, o músculo foi congelado em nitrogênio líquido e homogeneizado em tampão de lise (Tris-HCl 50 mM, pH 7.5; NaCl 150 mM; Tween 20 1%; ortovanadato de sódio 1 mM e aprotinina 10 µg/ml). O lisado muscular foi submetido a SDS-PAGE (gel de 7,5%) e, em seguida, as proteínas do gel foram transferidas para membrana de nitrocelulose e submetidas à técnica de "Western Blotting" para a identificação das proteínas específicas. As proteínas intracelulares IRS1, PI-3K e GLUT-4 estão envolvidas no mecanismo de ação do peróxido de ortovanadato de sódio. A IRS-2 não foi detectada nos experimentos.