Carecterização da molécula de vitelogenina expressa por machos de Rhamdia quelen (Teleostei, Heptapteridae) e sua utilização no biomonitoramento de ambientes aquáticos

Abstract

Resumo : A vitelogenina (VTG) é uma glicofosfoproteína expressa pelas fêmeas de ovíparos em resposta ao hormônio endógeno 17ßestradiol (E2). Machos ovíparos não expressam essa proteína, exceto quando expostos a compostos que mimetizem o E2. Alguns poluentes provenientes do despejo industrial, urbano e resíduos da atividade agrícola possuem estrutura semelhante ao do E2, sendo capazes de afetar o sistema endócrino e portanto considerados desreguladores endócrinos, levando machos a expressarem a VTG. Visto o aumento destes poluentes no ambiente natural e o seu potencial tóxico, tornase necessário caracterizar processos indicadores de tal disfunção, sendo que tais processos representam uma conseqüência da exposição do organismo a um agente químico estressor. Frente a tal cenário, o objetivo do presente trabalho foi caracterizar o processo de vitelogênese de Rhamdia quelen (Teleostei, Heptapteridae) e, produzir anticorpos policlonais que reconheçam a vitelogenina desta espécie, visando sua posterior utilização no biomonitaramento de ambientes aquáticos. Para tanto três grupos de animais forma utilizados: um de fêmeas e um de machos ambos adultos e, um de machos adultos injetados com 10 mg E2.kg-1 . Para a caracterização da VTG, sangue, fígado e gônadas foram coletados pós 17 dias de exposição. A caracterização do processo de vitelogênese foi realizada comparando-se parâmetros hepáticos, plasmáticos e gonadais de machos expostos ao estrógeno e de fêmeas em vitelogênese. O fígado foi analisado histologicamente e demonstrou aspecto vacuolizado tanto em fêmeas quanto em machos expostos ao E2. Indivíduos expostos ao estrógeno apresentaram ainda um aumento no índice hepatossomático e não apresentaram alteração no índice gonadossomático. As proteínas do plasma foram analisadas por SDS-PAGE, seguido de western blotting e por espectrometria de massa (MS). O resultado do SDS-PAGE demonstrou uma banda de 140kDa presente nos machos expostos ao estrógeno e nas fêmeas, porém ausente nos machos não expostos, indicando que a molécula foi induzida pelo estrógeno. Para comprovar a identidade da proteína em questão, realizaram-se ensaios de western blotting nos quais o anticorpo comercial anti-VTG reconheceu a vitelogenina expressa por fêmeas e machos expostos. A espectrometria de massa não identificou a proteína, porém verificou-se alta similaridade entre a estrutura da molécula das fêmeas e dos machos induzidos. Para a produção dos anticorpos a proteína foi isolada e coelhos machos foram imunizados. A especificidade dos anticorpos produzidos foi verificada por western blotting sendo que resultado foi o mesmo verificado para os anticorpos comerciais. Tais resultados confirmam a especificidade da molécula, porém análises complementares ainda são necessárias.