Desenvolvimento de um método por eletroforese capilar para quantificação e identificação de oligossacarídeos sulfatados

Abstract

Resumo: Macroalgas vermelhas são fontes de polissacarídeos sulfatados que, devido às suas propriedades, despertam grande interesse na indústria alimentícia e farmacêutica. A partir destes polissacarídeos é possível, via processos de hidróilse, a obtenção de estruturas de menor massa molecular - os oligossacarídeos. Neste trabalho, foi utilizada a hidrólise ácida parcial para obter oligossacarídeos a partir da galactana sulfatada kappa-carragenana, extraída da alga vermelha Kappaphycus alvarezii. Os oligossacarídeos formados apresentam sua unidade terminal 3,6-anidrogalactose na forma de aldeído hidratado. Para converter os oligossacaraídeos para sua forma alditol, estes foram submetidos à redução do grupamento aldeído utilizando NaBH4. Os oligossacarídeos alditóis foram submetidos à cromatografia de troca iônica utilizando DEAE - Sephacel. A eluição foi realizada com água destilada e em diferentes concentrações molares de carbonato de amônio - 0,05M; 0,075M; 0,100M; 0,125M. Em sequência, os oligossacarídeos isolados foram caracterizados por métodos espectroscópicos (RMN de 13C, 1H, COSY, HSQC) e eletroforéticos (Eletroforese Capilar, detecção indireta). Os seguintes di, tetra e hexassacarídeos foram obtidos: carrabitol 42-sulfato; carratetraitol 42, 44-dissulfato; e carrahexaitol 42, 44, 46-trissulfato, respectivamente. Estes oligossacarídeos foram utilizados como padrões para desenvolvimento e validação de um método eletroforético (eletroforese capilar) para quantificar e avaliar a produção e o tipo de oligossacarídeo em função do tempo de hidrólise por duas metodologias: HRP (hidrólise redutiva parcial) e HAP (hidrólise ácida parcial). As condições eletroforéticas usadas foram: 20kV a 30°C em tampão constituído de borato a 10mM, pH 9, em capilar de sílica fundido de 50 cm de comprimento e 50 ?m de diâmetro interno. A detecção foi realizada pelo método de detecção indireta usando ácido p-toluenosulfônico 10 mM como co-íon detectável a 214nm, em equipamento P/ACE Beckman 5010. O método de quantificação envolveu padronização externa e interna utilizando o poliol eritritol como padrão interno. Assim, a concentração oligossacarídica foi relacionada com as áreas dos picos presentes nos eletroferogramas, a fim de se determinar condições ideais para obtenção de oligossacarídeos com diferentes graus de polimerização. A obtenção de moléculas com estruturas químicas inéditas a partir de polissacarídeos sulfatados é interessante para estudos de bioatividade, sejam estes na forma nativa ou modificados quimicamente.