Avaliação do potencial imunomodulador de uma ß-galactana isolada dos frutos de Sicana odorifera, Cucurbitaceae

Abstract

Resumo: Polissacarídeos isolados de diferentes partes de plantas apresentam grande potencial de aplicação biológica, por exibirem baixa toxicidade. Diversas partes da planta da espécie Sicana odorifera são comumente utilizadas para fins medicinais. Recentemente, foi isolada uma ß-D (1->4)-galactana dos frutos de S. odorifera e no presente estudo os efeitos deste polissacarídeo em macrófagos peritoneais de camundongos foram investigados. Para isto, os macrófagos foram isolados, plaqueados e incubados com o ou sem polissacarídeo, por 6, 24 e 48 horas. Inicialmente foram avaliados quanto a viabilidade celular pelo método de metil- tetrazólio (MTT). Posteriormente, analisou-se as alterações na morfologia por microscopia optica, a atividade fagocítica pela fagocitose de S. cerevisae, a produção de ânion superóxido pelo método de nitroblue tetrazolium (NBT), a produção de óxido nítrico pelo método de Griess e a dosagem de interleucinas1 beta e 10 (IL-1ß e IL-10) e fator de necrose tumoral alfa (TNF-a) pelo método de ELISA. Os resultados mostram que em 24h de incubação 100 µg/mL da ß-D galactana diminuiu a viabilidade dos macrófagos em cerca de 20%. Ao contrário, em 48h houve aumento na viabilidade de 25% e 32% nas concentrações de 50 µg/mL e 100 µg/mL, respectivamente. Os grupos tratados com 50 µg/mL e 100 µg/mL do polissacarídeo promoveram diminuição de 47% e 67%, respectivamente, no número de macrófagos com perfil morfológico de ativação. A atividade fagocítica avaliada pela fagocitose de leveduras, após 48h de tratamento dos macrófagos com a ß-D galactana foi reduzida em ~ 50% com 50µg/mL, em relação ao grupo não tratado. Na presença de LPS (100 ng/mL) e a ß-D galactana a diminuição da atividade fagocítica foi de 40% e 33%, com 50 µg/mL e 100 µg/mL, respectivamente, em relação ao grupo tratado somente com LPS. A ß-D galactana não interferiu na produção de ânion superóxido pelos macrófagos em 1h de incubação. Por outro lado, a incubação na presença de LPS (100 ng/mL) e a ß-D galactana (50 µg/mL e 100 µg/mL), em ambas as concentrações houve redução de 70% na produção de ânion superóxido, comparado aos macrófagos tratados somente com o LPS. Em relação a produção de óxido nitrico em 48h, somente no tratamento simultâneo dos macrófagos com LPS 100 ng/mL juntamente com 50 µg/mL da ß-D galactana foi observado redução (19%) na produção deste mediador, em relação ao grupo tratado somente com LPS. Para as citocinas pró-inflamatórias avaliadas, em 6h de incubação 50 µg/mL da ß-D galactana aumentou em 100% a produção de TNF-a pelos macrófagos, em relação ao grupo não tratado, enquanto que 100 µg/mL do polímero não interferiu de forma significativa na produção desta interleucina. Macrófagos incubados durante 48h com 100 µg/mL da ß-D galactana reduziram em 95% na produção de IL-1ß, comparado ao controle sem tratamento. Em relação a produção de IL-10, uma citocina anti-inflamatória, 100 µg/mL da ß-D galactana promoveu aumento de 57%, em comparação aos macrófagos sem tratamento. Em conjuntos os resultados deste estudo demonstraram que a ß-D(1->4)-galactana de S. odorifera possui perfil imunossupressor

Abstract: Polysaccharides isolated from different plants show great potential of biological application, due their low toxicity. The Sicana odorifera specie is commonly used for medicinal purposes. Recently was isolated a ß-D(1->4)-galactan from fruit of S. odorifera and, in this present study the effects of this polysaccharide on mice peritoneal macrophages were investigated. To this, the macrophages were isolated, plated and incubated with or without the polysaccharide during 6, 24 and 48 hours. Initialy were evaluated for viability by the MTT method. Subsequently were evaluated the morphology changes by optical microscopy, the phagocytosis activity assessed by S. cerevisae , the production of superoxide anion by nitro blue tetrazolium (NBT) method, the production of nitric oxide by Griess method and dosage interleukin 1ß and 10 (IL-1ß and IL-10) and, tumor necrosis factor alpha (TNF-a) and by ELISA. The results show that in 24h of incubation 100 µg/mL of ß-D galactan diminished the cell viability of macrophages at 20%. In contrast, an increase of 25% and 32% with 50 µg/mL and 100 µg/mL, respectively in 48h, when compared with untreated group, was observed. The treated groups with 50 µg/mL and 100 µg/mL of the polysaccharide promoted decreasing of 47% and 67%, respectively, in the macrophages number with morphologic caracteristics of activation. The phagocytic activity after 48h of treatment of macrophages with the ß-D galactan was reduced in 50% with 50 µg/mL, in relation the untreated group. In the presence of LPS (100 ng/mL) and ß-D galactan the reducing in this parameter was of 40% and 33%, with 50 µg/mL and 100 µg/mL, respectively, in comparison with the treated group with only LPS. The ß-D galactan did not interfer in the superoxide anion production by macrophages for 1h of incubation. On the other hand, in the presence of LPS (100 ng/mL) and ß-D galactan (50 µg/mL and 100 µg/mL), for both concentrations the superoxide anion production was reduced at 70%, in comparison to macrophages in the presence only LPS. Regarding the production of nitric oxide for 48h, only in the treatment of macrophages with LPS 100 ng/mL plus 50 µg/mL of ß-D galactan was observed reduction of 20% in the level this mediator, in relation to the group treated with LPS. To the pro-inflammatory interleukins measured, in 6h of incubation 50 µg/mL of ß-D galactan increased at 100% the production of TNF-a by macrophages, in comparison to untreated group, while 100 µg/mL of the polymer did not interfer significantly in this interleukin production. Macrophages incubated during 48h with ß-D galactan (100 µg/mL) reduced at 95% the production of IL-1ß, compared with untreated cells. Concerning to IL-10 production, an anti- inflammatory interleukin, 100 µg/mL of ß-D galactan promoted an increasing of 57%, in comparison to control without treatment. Taken together, the results of this study show that the ß-D (1->4)-galactan of S. odorifera trigger an immunossupressor profile