Viabilidade de isolados bacterianos sob diferentes métodos de conservação

Abstract

Resumo: A escolha de um método padrão de conservação ou preservação de bactérias deve consider a capacidade de manutenção das características fenotípicas, genotípicas e patogênicas das culturas estocadas. Este trabalho avaliou a viabilidade, a integridade celular e a estabilidade morfológica de 73 isolados bacterianos provenientes de cama de aviário, com ênfase em 11 isolados submetidos a três métodos de preservação: conservação sob óleo mineral, criopreservação a -80 °C com glicerol e liofilização. A viabilidade reprodutiva foi determinada pela contagem de unidades formadoras de colônia (UFC/mL) em diluições seriadas, enquanto a viabilidade estrutural foi analisada pelo teste de exclusão com o corante azul de tripano, usando câmara de Neubauer. Análises complementares incluíram monitoramento temporal do crescimento pós-repicagem, verificação de contaminação por plaqueamento, e avaliação morfológica por coloração de Gram. Todos os isolados preservados sob óleo mineral mantiveram crescimento em meio sólido após 3, 6, 9 e 24 meses, apresentando baixa taxa de contaminação (14–16%), inferior aos valores relatados para culturas fúngicas na literatura. A comparação entre UFC/mL e exclusão celular revelou respostas dependentes da cepa e ausência de concordância direta entre células estruturalmente íntegras e reprodutivamente ativas, comportamento considerado biologicamente esperado. Isolados do mesmo táxon também exibiram desempenhos distintos entre métodos, reforçando que a eficácia da conservação não deve ser generalizada apenas por classificação taxonômica. Conclui-se que o uso de óleo mineral representa uma alternativa viável e de baixo custo para conservação bacteriana em coleções microbiológicas, especialmente quando acompanhado de múltiplos ensaios para confirmar viabilidade e pureza da cultura

Abstract: The choice of a standard method for preserving bacteria must consider its ability to maintain the phenotypic, genotypic, and pathogenic characteristics of the stored cultures. This study evaluated the protection, cell integrity, and morphological stability of 73 bacterial isolates from poultry litter, with emphasis on 11 isolates subjected to three preservation methods: preservation in mineral oil, cryopreservation at -80 °C with glycerol, and lyophilization. Reproductive prediction was determined by the concentration of colony-forming units (CFU/mL) in serial dilutions, while structural prediction was provided by the trypan blue dye exclusion test using a Neubauer chamber. Complementary analyses included temporal monitoring of post-subculturing growth, verification of contamination by plate, and morphological evaluation by Gram staining. All isolates preserved under mineral oil maintained growth on solid medium after 3, 6, 9, and 24 months, showing low contamination rates (14–16%), lower than the values reported for fungal cultures in the literature. Comparison between CFU/mL and cell exclusion revealed strain-dependent responses and a lack of direct concordance between structurally intact and reproductively active cells, a behavior considered biologically expected. Isolates of the same taxon also exhibited distinct performances between methods, reinforcing that the effectiveness of preservation should not be generalized solely by taxonomic classification. It is concluded that the use of mineral oil represents a viable and low-cost alternative for bacterial preservation in microbiological collections, especially when accompanied by multiple assays to confirm the guidelines and purity of the culture