Detecção e caracterização molecular de Mycoplasmas hemotrópicos e patógenos transmitidos por carrapatos em carcaças de animais silvestres no centro-oeste brasileiro

Abstract

Resumo: A região Centro-Oeste do Brasil é a segunda maior do país em extensão territorial, e a menos populosa, constituída por três biomas. O Cerrado, segundo maior bioma brasileiro e um dos 34 hotspots para a conservação da biodiversidade mundial, o Pantanal, maior planície alagável, e a Amazônia, maior bacia hidrográfica do mundo. Nos últimos anos, esses biomas vêm sofrendo perdas de biodiversidade devido às queimadas, agravadas por ações antrópicas. A antabrasileira (Tapirus terrestres, Linnaeus, 1758), é o maior mamífero terrestre do Brasil, listada como vulnerável à extinção. Está espécie possui potencial de albergar diferentes grupos de ectoparasitos e seus patógenos associados, incluindo as bactérias intracelulares dos gêneros Ehrlichia e Anaplasma. Portanto, os objetivos deste estudo foram investigar a ocorrência de Mycoplasma spp. e patógenos transmitidos por carrapatos em carcaças de antas acometidas pelas queimadas ou atropeladas em rodovias do Pantanal e do Cerrado e em seus carrapatos. Amostras de baço e coágulo coletadas de 22 antas e glândulas salivares de 177 carrapatos foram submetidas a análises moleculares por ensaios de PCR em tempo real (qPCR) para Mycoplasma sp. (rRNA16S) e convencional (cPCR) para Mycoplasma sp. (rRNA16S e 23S, RnaseP) e Ehrlichia/Anaplasma spp. (16S rRNA, dsb, sodB e groEL). Nove das 22 (40.91%) antas encontravam-se infectadas por carrapatos no momento da coleta, identificados morfologicamente como Amblyomma sculptum (67.80%), A. cajennense (15.25%), A. coelebs (2.82%), A. scalpturatum (0.56%), A. triste (1.13%) and Rhipicephalus microplus (2.26%). Dezesseis de 22 (72.73%; 95% CI: 51.85-86.85%) animais e 10/177 (5.65%; 95% CI: 3.10-10.09%) carrapatos foram positivos para Mycoplasma sp. O sequenciamento genético de fragmentos dos genes 16S e 23S para hemoplasmas confirmou que as antas estavam infectadas por diferentes espécies de hemoplasmas, Mycoplasma ovis, ‘Ca. M. haematobovis’ e ‘Ca. M. haematoterrestris’. Ainda, a detecção de Mycoplasma spp. em glândulas salivares de Amblyomma sculptum, A. cajennense, A. coelebs e Rhipicephalus microplus indica o papel destes artrópodes como vetores dos agentes patogênicos. Nove de 22 (40.91%; 95% CI: 23.26-61.27%) animais e três de 177 (1.69%; 95% CI: 0.58- 4.86%) carrapatos foram positivos para Ehrlichia/Anaplasma spp. O sequenciamento genético dos fragmentos do gene 16S rRNA dos patógenos das antas confirmou a infecção por Anaplasma sp., enquanto o sequenciamento dos fragmentos de dsb e sodB confirmou a infecção dos animais por Ehrlichia sp. O sequenciamento de fragmentos do gene dsb de um A. sculptum revelou a infecção por E. minasensis. Este é o primeiro relato de infecção por Ehrlichia sp. e Anaplasma sp. em Tapirus terrestris

Abstract: The Central-West region of Brazil is the second largest in the country in terms of land area and the least populated. It consists of three biomes: These are the Cerrado, which is Brazil's second largest biome and one of the 34 global biodiversity hotspots; the Pantanal, which is the largest floodplain; and the Amazon, which is the world's largest river basin. In recent years, these biomes have experienced biodiversity loss due to fires, exacerbated by human activity. The Brazilian tapir (Tapirus terrestris, Linnaeus, 1758), the largest terrestrial mammal in Brazil, is listed as vulnerable to extinction. This species can harbour various groups of ectoparasites and their associated pathogens, including intracellular bacteria belonging to the Ehrlichia and Anaplasma genera. Therefore, the objectives of this study were to investigate the occurrence of Mycoplasma spp. and tick-borne pathogens in tapir carcasses aUected by fires or roadkill on highways in the Pantanal and Cerrado regions and in their ticks. Spleen and clot samples collected from 22 tapirs and salivary glands from 177 ticks were subjected to molecular analysis by real-time PCR (qPCR) for Mycoplasma sp. (rRNA16S) and conventional PCR (cPCR) for Mycoplasma sp. (rRNA16S and 23S, RnaseP) and Ehrlichia/Anaplasma spp. (16S rRNA, dsb, sodB, and groEL). Of the 22 tapirs examined, nine (40.91%) were found to be infected with ticks at the time of collection. These were morphologically identified as belonging to the following species: Amblyomma sculptum (67.80%), A. cajennense (15.25%), A. coelebs (2.82%), A. scalpturatum (0.56%), A. triste (1.13%) and Rhipicephalus microplus (2.26%). Sixteen out of 22 animals (72.73%; 95% CI: 51.85–86.85%) and 10 out of 177 ticks (5.65%; 95% CI: 3.10–10.09%) tested positive for Mycoplasma sp. Genetic sequencing of fragments of the 16S and 23S genes for hemoplasmas confirmed that the tapirs were infected with diUerent species of hemoplasma: Mycoplasma ovis and ‘Candidatus Mycoplasma haematobovis’ and ‘Ca. M. haematoterrestris’. Furthermore, the detection of Mycoplasma spp. in the salivary glands of Amblyomma sculptum, A. cajennense, A. coelebs and Rhipicephalus microplus suggests that these arthropods play a role in transmitting pathogens. Nine out of 22 animals (40.91%; 95% CI: 23.26–61.27%) and three out of 177 ticks (1.69%; 95% CI: 0.58–4.86%) tested positive for Ehrlichia/Anaplasma spp. Genetic sequencing of fragments of the 16S rRNA gene of tapir pathogens confirmed infection by Anaplasma sp., while sequencing of fragments of dsb and sodB genes confirmed infection by Ehrlichia sp. in the animals. Sequencing of an A. sculptum dsb gene fragment revealed infection by E. minasensis. This is the first report of infection by Ehrlichia and Anaplasma species in Tapirus terrestris