Isolamento e catacterização dos genes nifA e nifB de Azospirillum brasilense

Abstract

Resumo: A conjugação do mutante nifA' de Azos/ri ri 11 um brasilense, FP10, com um banco genômico de A. brasilense em pLAFR3 permitiu o Isolamento de sete transconjugantes capazes de fixar nitrogênio. Os transconjugantes a p r e s e n t a r a m níveis de atividade nltrogenáslca próxima à observada para a estirpe selvagem (FP2). A presença dos pi as mídeos r e c o m b l n a n t e s , pMAK1-pMAK7, mostrou-se essencial à compIe me nt aç ão genética, pois os transconJugantes foram incapazes de fixar nitrogênio quando curados desses piasmídeos. Foram identificados quatro grupos diferentes de piasmídeos capazes de restaurar o fenótipo N li+ do mutante. 0 plasmídeo pMAK7 possibilitou ainda a compIementação do mutante nifB~ de Klebsiella pneumoniae <50581). Experimentos de hlbrld lz aç ão c om p ro va ra m a presença dos genes nifA e nifB no Inserto. Por outro lado, o plasmídeo pMAK7 foi Incapaz de co mplementar os mutantes deficientes na síntese do cofator FeMo, ntrC~ e nifHDK' de A. brasilense, bem como de hibridlzar com DNA-sonda contendo os genes nifHDK de A. brasilense. Os transconJugantes de A. brasilense FP10 contendo pMAK1 ou pMAK7 apresentaram inatlvação reversível da nitrogenase por N h * , semelhante 4 àquela observada na estirpe selvagem. Transcon Ju ga nte s de A. brasilense FP10 contendo esses piasmídeos apresentaram fixação de nitrogênio t amb ém a 37°C, ao contrário do que foi verificado para os t r an sc o nj u ga nt e s A. brasilense FP10 (p C K 3 ), contendo o gene nifA de K. pneumoniae. Esses dados sugerem que o produto do gene nifA de A. brasilense é termoestável a 37°C