Caracterização estrutural de polissacarídeos extraídos do fotobionte isolado do líquen Ramalina celastri

Abstract

Resumo: O fotobionte Trebouxia sp. isolado do líquen Ramalina celastri foi cultivado em meio BoIcTs Mineral modificado, contendo 1% de peptona e 3% de glucose, por 21 dias, a 21 °C (±2°C). As algas foram removidas por filtração, liofilizadas e submetidas a extrações seqüenciais com etanol, metanol:clorofórmio, metanol:água, água, KOH 2% e KOH 10%. A deslipidificação com etanol e metanol:clorofórmio forneceu um alto rendimento, cerca de 42,0% (g/1 OOg) em relação ao peso da alga liofilizada. O resíduo foi tratado com metanol aquoso a quente, cujo extrato apresentou cinco componentes na cromatografia em papel e um rendimento de 11,6%. A extração aquosa a quente da alga forneceu a fração PBEA (rendimento de 2,9%) com teor protéico 38,7% e amido 35,1%. A extração seqüencial da alga residual utilizando KOH 2% (fração PBEK2) apresentou rendimento de 3,9%, teor de proteínas de 54,2% e 28,1 % de amido. Por tratamento de congelamento e degelo, ambas frações apresentaram como precipitado amilose pura, confirmada pelos derivados metilados 2,3,6-Me3-Glc (98,3%) e 2,3,4,6-Me4 -G lc (1,7%) e por r.m.n.-13C, apresentando os sinais 99,9 (C-1), 78,8 (04), 73,1 (03), 71,9 (02), 71,5 (0 5 ) e 60,5 ppm (06). A fração sobrenadante do gelo/degelo da extração com KOH 2% foi purificada por tratamento com ácido tricloroacético 10% (demonstrando que a proteína não está ligada ao polissacarídeo) e a-amilase, originando um polímero contendo alta porcentagem de manose (81,7%). Uma p-xilana linear com ligações (1->4) foi obtida como precipitado de gelo/degelo da fração PBK10 extraída com KOH 10%. Apresentava-se contaminada por amilose, sendo purificada por ação enzimática da a-amilase. A estrutura foi confirmada por análise de metilação, onde apresentou os derivados metilados 2,3-Me2-Xyl (98,0%) e 2,3,4-Me3-Xyl (2,0%), por análises espectroscópicas de r.m.n.-1H e 13C e bidimensionais (COSY e HMQC). Esta molécula não foi encontrada no líquen Ramalina celastri