Caracterização da região promotora do operon glnBA de Azospirillum Brasilense

Abstract

Resumo: Azospirillum brasilense é uma bactéria fixadora de nitrogênio capaz de se associar com diversas plantas de interesse agrícola como milho e trigo, tendo, portanto, um potencial como biofertilizante. A regulação da fixação de nitrogênio neste organismo é bastante complexa e envolve as proteínas PI! e glutamina sintetase, produto dos genes glriB e glnA, respectivamente. Em A. brasilense os genes glnB e glnA encontram-se agrupados em um operon que apresenta três regiões promotoras distintas: duas a montante do gene glnB e outra localizada na região intergênica entre glnB e glnA. Nosso interesse neste trabalho foi de obter informações sobre a regulação da expressão destes genes. A expressão de glnB e glnA foi estudada em diferentes estirpes de A. brasilense contendo fusões transcricionais e traducionais glnB-lacZ e glnA-lacZ. A análise dos resultados indicou que a expressão dos promotores glnB e glnA é opostamente regulada em resposta a presença de amônio. Uma possível participação da proteína NtrC no controle da expressão de glnB e glnA também foi observada. Deleções unidirecionais e mutagênese sítio-dirigida dentro da região promotora do gene glnB, mostraram que sítios de ligação para NtrC são essenciais para a regulação da expressão de glnB. A proteína NtrC de A. brasilense foi capaz de ativar a transcrição de fusões glnB-lacZ quando expressa em células de E. coli. A proteína NtrC de E. coli purificada foi capaz de ligar-se à região promotora do gene glnB. Nossos resultados sugerem que a proteína NtrC tem um papel direto no controle da expressão do gene glnB de A. brasilense