Análogos funcionais da heparina

Abstract

Resumo: A mistura polissacarídica obtida por extração aquosa do endosperma de sementes de Senna macranthera foi purificada por centrifugação, originando a amostra SP, e por cromatografia de troca iônica (DEAE-celulose) dando origem a uma galactomanana - FA, com razão molar manose : galactose aproximada de 3 : 1. Essa é constituída de uma cadeia principal de unidades (3-D-manopiranosídicas ligadas (1—»4) com algumas unidades subtituídas em 0-6 por a-D-galactopiranose e outras unidadespodem estar substituídas nesta posição por a-D-manopiranose e essas substituídas em 0-6 por a-D-galactopiranose. Após a reação de sulfatação, os derivados de SP e FA foram caracterizados por métodos químicos e fisico-químicos. O grau de substituição (DS) foi determinado como sendo 0,17 e 0,54 para sulfatações seqüenciais da galactomanana SP e 0,4 para FA. Analisando seus espectros de RMN - C13, percebeu-se que a substituição por sulfato deu-se preferencialmente no 0-6 das unidades de a-Z>-galactopiranose e $-D- manopiranose. Os valores de massa molecular aparente, determinados pela técnica de gel permeação foram de 1,2 e 2,4 MDa para SP e FA, respectivamente; e 1,9; 1,7 e 2,4 MDa para os derivados SPS-0,17; SPS-0,54 e FAS-0,4, respectivamente. Estudos de propriedade anticoagulante, usando plasma normal humano liofílizado para as análises antes e após a cromatografia de afinidade utilizando-se matriz de agarose-AT III, foram realizados através dos testes de APTT e Heptest. Os resultados obtidos foram relacionados com a heparina padrão (183 Ul/mg, D. S. 0,6). Concentrações de SPS-0,17; SPS-0,54 e FAS-0,4, respectivamente com valores de 31; 8 e 20 pg / mL de plasma foram necessárias para se atingir a mesma atividade que a heparina com 1 pg ou 4,57 UI / mL de plasma. Estes derivados foram filtrados em membranas de poros 3 e 1,2 pm, obtendo-se aumento de atividade de 33 e 13 % para SPS-0,17 e SPS-0,54, respectivamente; enquanto o derivado FAS-0,4, após filtração, não apresentou aumento significativo em sua atividade. Amostras de SPS-0,54 e FAS-0,4 após filtração em membrana foram eluídas em coluna de agarose-ATIII com tampão tris/HCl pH 7,2 e NaCl seqüencialmente. Toda a atividade anticoagulante obtida para o material não eluído estava presente na fração aderida à coluna podendo-se sugerir que a atividade anticoagulante desta fração é devido à interação com a AT III. As amostras sulfatadas que ficaram aderidas à matriz de AT III foram submetidas ao Heptest e os resultados obtidos mostraram que os derivados sulfatados aceleraram a taxa de inibição do fator Xa pela antiprotease, confirmando a interação específica do polieletróíito com a AT III. Pode-se, assim, concluir que a galactomanana obtida a partir do endosperma de Senna macranthera, quando sulfatada, adquire atividade anticoagulante, podendo ser chamada de um heparinóide, principalmente por interagir de maneira específica com a AT III