Estudos cinéticos da D-Gliceraldeído-3fosfato desidrogenase (GPDH) de células HeLa

Abstract

Resumo: Pela importância da GPDH no metabolismo de carboidratos de células normais e tumorais e pelos poucos relatos na literatura sobre estudos cinéticos da enzima de fonte tumoral, foram realizados no presente trabalho alguns estudos cinéticos com a GPDH de células HeLa comparando os resultados com as de fontes normais já estudadas. A GPDH de células HeLa apresentou máxima ativação em presença de 2-mercaptoetanol ou ditioeritrítol na concentração de 1 mM. A enzima foi totalmente inibida em presença de íons metálicos pesados como HgCI2l CuCI2 e CdCl2 na concentração de 1 e 2 mM. Em relação aos inibidores de grupos-SH, a GPDH de células HeLa apresentou 100% de inibição na presença do p-CMB e do p -HMB [0,01 mM], e 80% de inibição na presença de iodoacetamida, N-etilmaleimida e 2-cloro 4-aminobenzoato [0,1 mM]. As inibições causadas pelo p-CMB e pelo pHMB foram parcialmente revertidas por excesso de 2-mercaptoetanol (5 mM), porém as inibições por iodoacetamida e N-etilmaleimida foram irreversíveis. Os nucleotldeos ADP, 5'-AMP e 3-5'AMPc inibem competitivamente a enzima em relação ao NAD*. Os Ki calculados pela relação de MASSEY, (1953) foram de 2,1 , 1,0 e 0,6 mM para o ADP, 5-AMP e 3-5'AMPc, respectivamente. Dos nucleotí- deos testados (ATP, ADP, 5'-AMP, 3'-5'AMPc, UPD, CDP e CMP) o mais potente inibidor da enzima foi o 3'-5'AMPc. A enzima [2,5 pM] foi inativada quando incubada na presença de NADH ou G3P (0,05 e 0,5 mM), a 37°C. O 2-mercaptoetanol 1 mM protege a enzima da inativação pelo NADH e pelo G3P. O EDTA não afeta a estabilidade da enzima em relação à inativação pelo NADH. Em todos os estudos cinéticos realizados a GPDH de células HeLa apresentou comportamento semelhante ao das GPDHs de outras fontes já estudadas