Estabelecimento de uma linhagem de melanoma B16F10 superexpressando ABCG2 para avaliação futura de inibidores em modelos metastáticos murinos e membrana corioalantoide

Abstract

Resumo: Entende-se por câncer o conjunto abrangente de mais de 100 doenças, cujas características em comum são a proliferação celular descontrolada e a invasão de tecidos. Os mecanismos e características desenvolvidos durante a formação do câncer são descritos como Hallmarks of Cancer, e um dos maiores desafios na Oncologia é o fenômeno conhecido como Multidrug Resistance (MDR). A MDR no câncer é ocasionada principalmente pelos transportadores ABC, proteínas transmembrana que realizam o efluxo de quimioterápicos para o meio extracelular, sendo o ABCG2 um dos seus principais agentes. Uma estratégia para superar a MDR causada pelo ABCG2 é a utilização de inibidores específicos, como a Cromona 4a um potente inibidor capaz de restaurar a sensibilidade de células resistentes à quimioterapia. Enquanto a caracterização do mecanismo bioquímico e molecular desse inibidor já foi estudada em modelos in vitro e in sílico, sua validação em modelos mais complexos, como modelos in vivo, nunca foi explorada. Assim, este estudo estabeleceu uma linhagem celular murina, B16F10MX2.5C9S4, superexpressando ABCG2 por meio da exposição à mitoxantrona. Além disso, foi testado e validado um modelo de inoculação de células B16F10 na veia caudal de camundongos BL67C/6, resultando na formação consistente de tumores metastáticos no pulmão. Ademais, um modelo utilizando a membrana corioalantoide (CAM) de ovos de galinha fertilizados foi estabelecido a partir da inoculação de células humanas que superexpressam ABCG2, resultando na formação de tumores primários sobre a CAM. Futuros estudos empregarão esses modelos para avaliar a eficácia da Cromona 4a em combinação com quimioterápicos substratos de ABCG2, como mitoxantrona

Abstract: Cancer comprises a large group of more than 100 diseases characterized by uncontrolled cell proliferation and possible tissue invasion. The capabilities acquired during the development of cancer are known as Hallmarks of Cancer, and a major therapeutic challenge in oncology is multidrug resistance (MDR). The MDR in cancer is mainly caused by the ABC transporters, proteins that pump chemotherapeutic drugs out of the cell, with ABCG2 being a prominent player. One strategy to overcome ABCG2-mediated MDR involves the use of specific inhibitors, such as chromone 4a, a potent ABCG2 inhibitor that restores chemosensitivity of resistant cancer cells. While the biochemical and molecular mechanisms of chromone 4a have been characterized in in vitro and in silico models, its validation in more complex in vivo models remains unexplored. This study established a murine melanoma cell line, B16F10MX2.5C9S4, overexpressing ABCG2 througth clonal selection with mitoxantrone exposure. Furthermore, it was tested and validated the inoculation of B16F10 cells via caudal vein injection into BL67C/6 mice, resulting in consistent lung metastatic tumor formation. In addition, a model using the chorioallantoic membrane (CAM) of fertilized chicken eggs was established by inoculating human cells overexpressing ABCG2, resulting in the formation of primary tumors on the CAM. Future work will employ these models to evaluate the efficacy of Chromone 4a in combination with ABCG2-substrate chemotherapeutic agents, such as mitoxantrone