Atividade proteolítica extracelular de Thelephora terrestris

Abstract

Resumo: O fungo ectomicorrízico Thelephora terrestris libera no meio de cultivo uma atividade proteolítica que foi caracterizada, A atividade proteolítica extracelular foi demonstrada usando azocaseína como substrato com Km(app) de 2,0 ± 0,5 mg/mL. A atividade extracelular de azocaseinase demostrou ser ótima a pH 4,8 e estável por 24 horas a 4o C, na faixa de pH 4,0 a 5,6. A temperatura ótima da atividade enzimática foi de 40° C, sendo que a 50° C perde em torno de 50% da sua atividade em 10 minutos de incubação. A atividade proteolítica foi inibida por 5 mM de pCMB (70,28%), por EDTA 10 m i (72%), por pepstatina 1jiM (45%), por E-64 0,25 mM (22%) e por PMSF 4mM (21%). Os níveis de atividade proteoítica extracelular reportado por massa micelial não variaram com o aumento da concentração de glucose no meio, mas foram reprimidos por concentrações de fosfato de amônio superiores a 3,7 mM. Quando a gelatina foi utilizada como fonte de carbono e nitrogênio houve a duplicação nos níveis de enzima. As adição de glucose ao meio contendo gelatina resultou na repressão da atividade enzimática. As secreção de enzima somente foi detectada em cultivos com agitação. A análise eletroforética demonstrou a presença de 3 bandas protéicas com atividades enzimáticas